常见血液肿瘤FISH检测小册.docx

沁A1.1.Ui*31*>0U'h'Uj常见血液肿瘤FISH检测小册一.FISH是什么FISH即荧光原位杂交技术(F1.uorescenceinsituhybridization),是在细胞遗传学水平上检测染色体与基因数目和结构异样的种分子病理检测技术。其基本原理是利用标记/荧光素的核酸作为探针，根据碱基互补原则，与待检样本中与之互补的核酸经过变性-退火而形成杂交双链核酸，然后通过荧光显微镜进行检测和分析。FISH技术具有直观、快速、敏感性高和便利敏捷等特点，目前已经广泛应用于临床的肿瘤遗传学与各种基因相关疾病的分型与个体化治疗等多个领域。二.血液肿痛的诊断分型M1.CV：血液肿瘤诊断的精确分型是临床选择正确治疗方案的前提，目前国际上通用的是结合细胞形态学常肿篇I；IS1.1.桧测小朋(Morpho1.ogy)-,免疫学(Immuno1.ogy)»细胞遗传学(Cytogenetics)和分子生物学(Mo1.ecu1.ar)的学CM分型。形态学诊断(Morpho1.ogy)细胞学：外周血、骨髓涂片，淋巴结穿剌组织学：骨髓、淋巴结活检免疫学检查(I11三uno1.ogy)免疫组化(IHC),流式细胞(FCM)堂M而清¾I；HI1.蛤制小限jJ>*nf7Trm,1*1.,f细胞遗传学检查(Cytogenetics)核型分析，荧光原位杂交(FISH)分子生物学检查(Mo1.eCU1.ar)PCR,DNA测序三.FISH技术的作用与优势FIS1.I作为一项很重要的分子遗传学常肿篇1；IS1.1.桧测小朋检测技术，在血液肿瘤的诊断中有很大的作用，得到了NCCN等国内外各大血液肿瘤诊疗指南的认可和建议。1.1.前与血液肿瘤相关的FISH探针有接近100种，常用的就有60种左右，包括急慢性白血病、骨艇增生异样综合症(MDS),多发性骨髓瘤(MM)、淋巴瘤等多种血液肿瘤。F1.SH技术的相对优势I堂M而清¾I；HI1.蛤制小限If1.>*n'*'W>k*-7*/ FISH技术更敏感，可检测出核型分析检测不出的微小缺失或易位，如NDS中的5q缺失综合征： FISH技术不须要中期分裂相细胞，而核型分析须要培育时间较长且须要较高的操作要求； FISH技术是在细胞形态的基础上进行结果判读，可有效地降低假阴性或假阳性的风险，而PCR技术经过倍增常肿篇I；IS1.1.桧测小朋扩增，不能在形态的基础上判读，对试验要求高，易产生假阴性或假阳性。四.常用的血液F1.SH检测探针急性粒细胞白血病（AM1.）：样本建议骨1nIAM1.I/ETO融合基因（M2b分型）PV1./RARA融合基因（M3分型）cCBFB基因断裂(M4分型) KMT2A(M1.1.)基因断裂(预后差，治疗失败风险高)其他：口8号染色体、CBFBMYH11基因融合、口RARA基因断裂、5q缺失、口7q缺失、EVI基因断裂慢性粒细胞白血病(CM1.)：样本优先骨tt BCRB1.(DF)融合基因检测(指导格列卫用药)C嗜酸性粒细胞增多症(格列卫作用靶标)：PDGFRA基因断裂、口PDGFRB基因断裂、口FGFRI基因断裂其他：BCRAB1.(ES).BCRB1.(SF).i(17q),DASS基因缺失3急性淋巴细胞白血病(A1.1.):样本建议骨1ETV6（TE1.）/AM1.1.融合基因（预后较好，但易豆发）oTCF3（E2A）基因断裂（标准化疗后易早期豆发）oBCR/AB1.融合基因（易快速复发,对挽救性化疗反应不佳）o儿童急性淋巴细胞白血病染色体与基因异样（4、10、17、TE1./AM1.R常K血液肿篇I；IS1.1.桧测小BKMT2A基因断裂、BCRB1.(DF),预后评估与治疗方案的选择)其他：TCI3(E2A)/PBXR口4、10.17；MYC基因断裂、口IGH基因断裂、KMT2A基因断裂、口CDKN2A(P16)基因缺失慢性淋巴细胞白血病(C1.1.)样本优先外周血或骨C慢性淋巴细胞白血病染色体与基因异样(P53、RB1.(13qM)、ATM(1.1.q22)、D13S25(13q1.4)x12,预后评估与治疗方案的选择)其他：D1.EU1(13q1.4),P53.ATM(I1.q22)x口MYC基因扩增、6q、TERC,G1.I,12,BC1.21.G1.kCCND3IGH骨增生异样综合症(MDS):样本建议骨up¾i;ISHK?/U111J>*nA'"!Wk<-(,1J4.-*/C骨髓增生异样综合症染色体与基因异样(5q、7q、20q、8、X/Y,预后评估与治疗方案的选择u其他：口5q,7q,20q,DEGRKEVI1基因断裂、XY6多发性骨0痛(If1.O：样本建议骨U多发性骨锄痛染色体与基因异样(P53、1.c2kRB1.(13q1.4)xD13S319(13q1.4).IGH,预后评估与治疗方up¾i;ISHK?/U111J>*nA'"!Wk<-（,1J4.-*/案的选择）D其他:CCND1.（BC1.1.）/IGH,MAF/IGH、FGFR3/IGH、MAFB/IGH、CCND3IGH,1.1.q23与D1.EI1、口P53口15q22与6q21、1.q21与IP36、IGH基因断裂7淋巴病，样本建议骨Ie或淋巴结穿剌 MYC/IGH融合基因（协助诊断伯基特淋巴痛、高分级R细胞淋巴瘤的¾kiup¾i;ISHK?/U111J*»»IA'/T'W««-,JAJf.-*7治疗） BC1.2/1GH融合基因（协助诊断涌泡性淋巴瘤）oA1.K基因断裂（协助诊断间变性大细胞淋巴瘤，指导克噗普尼用药 CCND1.（BC1.1.）/IGH融合基因（协助诊断套细胞淋巴瘤，鉴别诊断MC1.和C1.D IGH基因断裂（发生多种类型的11,p¾hjHiSIIEr1.41.111J*»»IA'/T'Wk<-IJf.-*7淋巴瘤中，与超过50种基因融合）UMA1.T1.基因断裂（协助诊断粘膜相关淋巴组织淋巴瘤，指导HP化疗方案）CBC1.6基因断裂（D1.BC1.中预后较佳，指导治疗方案）8骨移植后嵌合状态监测（X、Y）rX和Y染色体检测五.常见血液肿病FISH探针介绍血液肿痛中常见FISH探针有四种类型,应用于基因融合、新裂、扩增和缺失检11,p¾hHiSIIEr1.41.111J"Wk*-JJa.-*7基BCRB1.GSP因(DF)融合BCR融基因检测GSP©合探针AB1.基因断裂IGH基因断裂检测探针GSPIGH11,p¾hHiSIIEr1.41.111J"Wk*-IJt.-*7基因扩增MYC基因扩增检测探针GSPMYCCSP8基因缺失P53基因缺失检测探针GSPP53CSP17©注:,1I1.F¾I-1S1.1.Er,1.1.1.1.11*红色标记表示该基因探针标记红色荧光素（R）.荧光显微镜相应滤块下视察为红色信号点（某些参数滤块下显示为橙色信号）；*绿色标记表示该基因探针标记了绿色荧光素（G）,荧光显微镜相应滤块下视察为绿点信号点：*黄色标记表示该基因探针包含一组分别标记了红、绿两种荧光素的探针组合,荧光显微镜单通道滤块下可视察到相应颜色信号点（绿色或红色信号点），双通道滤块下可视察到红绿相邻或重在信号（融合，F）o1.急性粒细胞白血病（AM1.）常用FISH检流靶标:AM1.I/ETO基因融合、PM1.RAR基因融合、CBFB基因断裂、N1.1.基因断裂 AM1.1/ET0融合基因检测一M2b分型的标记,1I1.F¾I-1S1.1.Er,1.1.1.1.111）协助诊断：AM1.I/ETO融合基因在M2患者中的发生率20%-40%,在M2b亚型中发生率高达90%,是M2b分型的标记，在M1.和幽中少见。2）推断预后：AV1.I/ETO融合基因阳性是预后好的标记，患者对治疗反应佳，完全缓解率可达90%,5年无病生存可达50%-70%o PM1./RARA融合基因检测TO分型的1)协助诊断：PM1./RARA融合基因可见于95%以上的AP1.中，成为M3的一个特异标记，预后好,约占全部AM1.的9%。2)指导用药：全反式维甲酸(ATRA)和三氧化工碑能靶向降解PM1.RRA融合蛋白，复原野生型PM1.和RARA基因功能,解除其对基因转录的抑制，诱导细胞发生分化和凋亡，使AP1.得到有效治疗。,1I1.F¾I-1S1.1.Er,1.1.1.1.11ATR与化疗联合运用可使AP1.的完全缓解率达90%-95%,并可使70%以上的患者得到长期生存。 CBFB基因断裂T4E0特征性的遗传学变更1）协助诊断：CBFB基因断裂重组是AM1.的特征性染色体异样，占总AM1.患者的5%-10%23$的M4患者，通常见于AM1.-M4E0亚型，在M2,M5与M4（无嗜酸性粒细胞增多）中较少。现在认为CBI-B基因断裂重组是M4E0特征性的遗传学变更。2）推断预后：大多数CBFB基因断裂重组的AM1.患者对化疗敏感、预后较好。 M1.1.基因断裂D协助诊断：在成人急性髓细胞白血病（AM1.）中，则主要见于M4/M5亚型。2）推断预后：除t（9：11）,t（10511）常肿篇I；IS1.1.桧测小朋以外，大部分M1.1.重排白血病缓解率低，并且第一次缓解后极易复发，生存期短,预后很差。在AM1.中单纯M1.1.断裂提示预后中等。2.慢性粒细胞白血病（CM1.）常用FISH检测靶标：BCR/AB1.基因融合BCR/AB1.融合基因检测一CM1.诊断的“金标准”I）协助诊断：t（9；22）（q34;q1.D易位形成的BCR/AB1.融合基因是CM1.的标记物,95%CM1.患者可检测出典型的t（9；22）（q34:q1.1.）易位,约5%的CM1.患者通过核型分析难以检测到Ph染色体，但可检测出融合基因存在，仍被归为Ph+OM1.分类。2)指导用药：对初诊患者进行BCRB1.检测，可以进行酪氨酸激陶抑制剂受益人群筛查。格列卫可用治疗费城染色体阳性的慢性髓性白血病(Ph+Cv1.)的慢性期、加速期或急变期。3)疗效监测：Ph染色体存在于CM1.的整个病程中，治疗缓解后，仍持续存在，只有消退Ph阳性克隆，才能达到最终治,1I1.F¾I-1S1.1.Er,1.1.1.1.11JJ/1.>*n'T'W>4<-f*74*/。FISH可用于治疗期间患者体内BCRB1.融合基因细胞量动态变更的检测，用于后续的治疗方案选择与药