乙型肝炎e抗原（HBeAg）操作规程.docx

乙型肝炎e抗原(HBeAg)操作规程1.操作步骤：(1)配液：浓缩洗涤液配置前充分混匀(如有结晶析出应充分溶解)，将浓缩洗涤液(25*)用蒸镭水或去离子水按1：19稀释后使用。(2)编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴阳性对照各2孔和空白对照1孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂)(3)加样：分别在相应孔中加入待测样品50微升和阴，阳对照50微升及质控血清。加酶标抗体：空白对照孔不加酶标试剂，每孔加入酶结合物50微升，轻轻振荡混匀。温育：置37°C温育30分钟。(6)洗涤：手工：扣去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置浸泡3060秒，扣去洗涤液，重复5次在吸水纸上拍干。洗板机：将孔内液体甩干。选择4次洗涤程序，洗板后在吸水纸上拍干。(7)显色：每孔加入显色剂A,B液各1滴(50微升)，轻轻振匀，370c避光显色15分钟。(8)终止:每孔加终止液1滴(50微升)，混匀。(9)测定：用于酶标仪读数，取波长450nm(建议使用双波长的酶标仪比色，参考波长63Onm)测定各孔OD值先用空白孔校零，然后读取各孔OD值。2.结果判断(1)目测：在白色背景下观察各孔显色情况，有明显黄色者为乙型肝炎e抗原(HBeAg)阳性；无色者为乙型肝炎e抗原(HBeAg)阴性。(2)酶标仪检测: 临界值(CUT/OFF)计算：CUT/OFF=阴性对照孔OD均值NX2.Io(阴性对照孔OD值低于0.05者按0.05计算，高于0.05按实际OD值计算) 阳性判定:样品OD值大于或等于COV值时,说明该样品HBeAg阳性。 阴性判定：样品OD值小于COV值时，说明该样品HBeAg阴性。