StepOnePlus型PCR仪操作规程和PCR仪简易设置指南设计.docx
StepOnePIus型PCR仪操作规程1 .StepOnePIus上机可由两种方式来进行：由StepOneSoftwareQuickStart进行上机或由StepOnePIus机器面板直接触控上机。2 .由StepOneSoftwareQuickStart进行上机：开启StepOneSoftwarev2.0进入主画面后点选QuickStart窗口进行快速上机设定。进入ExperimentProperties后输入：ExperimentName及档案储存位置；选择ExperimentType选择使用荧光系统；选择RampSpeed选择实验样品种类；点选RunMethod确定PCR反应条件是否需要修改后，按下STARTRUN0如欲使用StepOnePIus机器上VeriFIexBlock的功能，请由左方Setup功能列上点PlateStePUP窗口，在"AssignTargetsandSamples,窗口下，勾选EnabIeVeriFIexBlock选项，此时Block即被分成六个区块。接着点选RunMethod,½runprogram上点一下欲调整的温度步骤,选择“Setdifferenttemperaturesforoneormorezones,并设定每个区块的温度，请注意两相邻区块温度差异不可以超过5度，第一和第六区块最多可差异25度。按下StartRUnNoW进行data收集，反应结束后，则会回到“MainMenu”画面,触控CollectResult将data存出。3 .由StepOnePIus机器面板直接触控上机：开启电源后，进入主画面，由触控式屏幕来进行StePonePlUS的设定。按下TaqManCDNA(Standard)iPCRThermalCycleProgram,可利用下面工具列再重新编辑反应条件，如果条件相同则直接按下Save0如欲使用St叩OnePIUS机型上VeriFIexBlock的功能，请点选OPtionS下的VeriFIexstep并设定每个区块温度，请注意两相邻区块温度差异不可以超过5度以上，第一和第六区块最多可差异25度。触控需要更改之处则会跳出触控式键盘，重新给予实验名称、选择档案储存的Folder、并更改实际反应样品体积，按下Save&Exit；然后在BrowseLastAccessedExperiments下选择刚设定好的实验，按下StartRuno此时跳出警告标示，提醒之前的档案是否存出，如果已经将前一个档案存出的话，则可直接触控Overwrite进行Data收集;如未储存的话则触控Collect将Data存出。确定反应体积及实验名称无误后，触控StartRunNow,则会进入PCRProgram实时显示画面。反应结束后，则会回到“MainMenU”画面，触控CollectResults将data存出后，再回到StePOneSoftWare进行实验盘建立及分析。清洁与维护保养：1 .外壳要用柔软的布配合温和的清洁液清洗，不要用酒精或其他洗涤用品；加热孔可以用酒精棉球擦洗，但在清洗前应注意加热板的温度需降至室温。2 .注意保持热盖和Block的清洁，特别注意不能将带有荧光染料的试剂溅洒在热盖或者Block里，否则需用蘸有70%酒精（纯酒精稀释在蒸储水里）的干净棉球擦洗，直到不影响实验结果。注意事项：1 .为避免触电事故，仪器的输入电源线必须可靠接地。2 .操作人员不得擅自打开仪器，元件的更换或机内调节须由持证的专业人员进行。3 .在连接交流电源前，需保证电源电压与仪器要求电压一致220V（允许偏差土10%）,并确保电源插座的额定负载不小于仪器要求。StepOne定量PCR仪简易设置指南启动电脑，打开定量PCR仪电源开关：双击桌面“StepOneSoftware”图标,出现LOgin登录界面，点击“0K”，打开软件。LoginTologintothesoftware,either:Click"LoginasGuesttologinanonymously,orSelectanexistinguserfromthedrop-downlistorenteranewusernameinthefield,thenclickm0KmUserName:GUESTLogin as Guest起始界面如图所示，点击红色椭圆的三角图标，展开软件功能按钮。；NwEx(4rmert-3细n. Ii ' 9nd £8WnE 力 ElVnfE. R点击左侧"SetUp”功能选项中的"AdvancedSetup”高级设置向导。StepOiitieSofLwnrt*v2.iDM帛nstumr金曲3IMUBtfew&wcmert-3例仙.Ii立StndEgiMtiomrg_在打开的设置界面，左侧为导航树，选择不同的功能选项，右侧显现为不同的设置功能。默认条件下,显示为uExperimentProperties,实验属性。-NtwEjcceiinwrtQpvn.kJg*U£1。“8rrtEpwmrttohjtnmm.D<w*o<lEj*rr<ttvnnrtmrt,>Pflrt念Pnntap.右侧界面，带有红色*号位置需要输入或者通过鼠标进行选择。不带*号位置为选填，可以保持空白。在途中位置输入实验名称，该名称根据需要进行填写。FloE四 版UHKnb4 Ayb:一 ；3k H岬.M"ExpnmF Cpon. Q Cse 'J. j 8ndHmntR5ument. £ D*n2RbyLOrrttornInUlUnWrt 9 POrt Q1 P)t Ropon .ExpwinwntMonu «1 f)ofmont 20091210出IPtp FupMelh0R3fonM*l"lIitlTypeStandafd CurvoRoa90nt5IjqManflRcMqonIspeafc4n<t*1Propttt>一unt> 选择仪器类型、实验类型、荧光标记方法以及反应速度。IGPOnCelSoftWjtro v2. INwE>pfMfH*open St Li 9。“ 包 <CItWrt T 5/EEDowKOWLrwMfimmmttunMrt.Export - 3 NEW左侧导航树，选择"PlateSetup”设置选项。右侧“DefineTargets"选项下“TargetName”处设置检测基因的名称,如FIuA,Reporter下拉菜单选择"FAM”,Quencher下拉菜单选择“None”kiHsawrmec<W0n.SmGCM仪；SeME，PMWEiQIrVmcftExporimontMonu «1 bM>mcfil 20091210IyPOStiindiifd CmvoRo<qont%1.qManH Ro<K)ntsSetupSTAlrTMI Kpciimcnt rj><u1nnHunM.etoo1)efnI argots and SamPIeS Asagn Targ¾ and Sampg 三 _UnMM Re*cnon点击“AddNewTarget”，并按照第7步所述进行设置。根据需要添加所需基因,如SWH1、SWFIuAI和RNPoStepOneeSoftwarev2.1以eEdtrshjTwn：An¼i;IOUlihcpJWw5t*EEJ2t*nJS*Vd£卜”33dE<*l<nwttobmt行D*mSXBwefMnItQmmUwmwi4*!P°hAPrtmR«w»t.SetupExponmonlMonu «I EXPQlVncmt 20091210TypeStiIndiMd QmyoRoqontsInqM nt RoaqonWHHPlate SelvpRunMt*Hl¼lu*nMMhnd H IUnrtinft ,.rhpAnalysisMplNiNMtntPlO0r1lfMlntucutl)efnIarqets and SamPleS ASSlgn Targe?Sana 3a¾p5在“DefineSamples”填写检测样本的名称，如果需要多个样本，通过“AddNewSample”添加多个样本。>>-;一 ：r a ，-j' 一>°'，： ，祈 m ir "W r:Cm FI，mr - ;«! -、 ,r<f,rr ："鼠标点击"AssignTargetsandSamples"切换设置界面。鼠标滑倒图中椭圆所处位置，变化为双向箭头，通过拖动鼠标，可以改变左右两侧窗口大小。MStcpOnceSoftwarev2.1FMt6<>num:AnttyveTortshp.Ntw&HrvrertJQtn.UIJCkse,iSerdEp<rtrwl!Dkrtlui>f4MWX-ExporimontMenu «rxpomcnf200920Tyi)0 SIandiICdCulVORougoiit?; .MnH Ro.hciI,Dgtlrt8 argt5 and Sampfes» Kpiuimrnt rrmlftm,atHr V.omoo11R>don SetFMtotlsList.UnMl”Totfu*undtr<hImInKtMmS即UCkr- 4<M1WM.峥；匕”叱 >4d V (UmeM*ZlHlcrmyh ttrgel ”如Wn，”二，s>mptfTotvluprw0«ttfo corftol: S44odwo , i；s»n tMQvKt,*nslvct(NcsW C(rtf3O mcttorhtif90( i jrmr<Assigntrgt(t) to t sHctd wNs.，sIg"mKlIrnlD'32 Q niovr 口 Su-aao 口 >。M5A”Wn>mple<s) to tb selected wll>.鼠标选择样品放置的位置，如B4,鼠标勾选样品名称及所要检测的基因。根据样品孔的数量，依次进行设置。“NtwEaepenmert J n. i 6* S %EWfEfntR InauEM. OweodEwtnmrifrm *'>t 9 E?W £k PwtRport.»Urm*鼠标拖动椭圆位置，向下拖动。在“Selectthedyetouseasthepassivereference”的下拉菜单处选择“None”L*'、川-： A 1-* 一二 一1 .： m.r./., ：:. ( '. I - -.1'点击“RunMethod"设置反应条件：在“ReactionVolumePerWel,处输入反应体积,如
