化学发光原理.ppt

1234FITCFITC标记的抗体与酶标抗体均和待测抗原不同表位标记的抗体与酶标抗体均和待测抗原不同表位结合，形成结合，形成“三明治三明治”复合结构。通过磁固相上的复合结构。通过磁固相上的FITCFITC抗体捕获分离抗体捕获分离“三明治三明治”复合物，加入发光底复合物，加入发光底物，底物在酶的作用下的被催化裂解，形成不稳定物，底物在酶的作用下的被催化裂解，形成不稳定的激发态中间体，当激发态中间体回到基态时便发的激发态中间体，当激发态中间体回到基态时便发出光子，形成发光反应。出光子，形成发光反应。5YYY被测抗原被测抗原+FITCFITC标记标记抗体抗体Y Y酶标抗体酶标抗体Y磁微粒磁微粒抗体抗体YYYYYY6间接法适用于检测对象是自身抗体的情况间接法适用于检测对象是自身抗体的情况,比如比如人甲状腺球蛋白抗体（人甲状腺球蛋白抗体（TGAB）和甲状腺过氧）和甲状腺过氧化物酶抗体（化物酶抗体（TPOAB）。）。由于抗体是由于抗体是IgG，引入酶标二抗捕获，引入酶标二抗捕获IgG。为了。为了消除样品中其它消除样品中其它IgG对实验结果的影响。先用磁对实验结果的影响。先用磁珠将待测样品中待测物分离，通过洗涤后消除珠将待测样品中待测物分离，通过洗涤后消除影响，再用标记的二抗对待测物进行结合完成影响，再用标记的二抗对待测物进行结合完成化学发光。化学发光。7PYY待测血清待测血清YYPYYYYYYYYPYYPYYYYPYYY待测抗体待测抗体Y抗抗FITC抗体抗体PFITC标记抗原标记抗原Y酶标抗体酶标抗体磁珠磁珠8待测抗原属于小分子，没有足够的抗原决定簇。用已知量待测抗原属于小分子，没有足够的抗原决定簇。用已知量的标记抗原，对比竞争酶标抗体。的标记抗原，对比竞争酶标抗体。若待测物浓度高若待测物浓度高, ,与衍生物抗原竞争，定量酶标抗体与待与衍生物抗原竞争，定量酶标抗体与待测物结合量则多，反应发光信号值低；若待测物浓度低，测物结合量则多，反应发光信号值低；若待测物浓度低，与衍生物抗原竞争，定量酶标抗体与待测物结合量则少，与衍生物抗原竞争，定量酶标抗体与待测物结合量则少，反应发光信号值高。反应发光信号值高。9Y待测样品待测样品YYYYY待测抗原待测抗原FITC标记标记的抗原衍的抗原衍生物生物Y酶标抗体酶标抗体YYY待测样品和衍生物跟抗待测样品和衍生物跟抗体的竞争结合体的竞争结合Y用磁珠筛选和抗原衍生用磁珠筛选和抗原衍生物，通过发光计算浓度物，通过发光计算浓度10Thanks!