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动物疫病病原学监测技术动物疫病病原学监测技术主要内容主要内容一、一、2012年病原学检测工作情况年病原学检测工作情况1、与与20112011年相比，年相比，病原学病原学检测水平明显提高。检测水平明显提高。n 大部分省辖市都已经把大部分省辖市都已经把PCR检测作为日常动物疫病诊断检测作为日常动物疫病诊断的常规手段。的常规手段。驻马店、济源、焦作、郑州等驻马店、济源、焦作、郑州等实验室实验室PCR检测工作量大，结果准确、报告规范。检测工作量大，结果准确、报告规范。n 焦作、郑州、开封、平顶山等焦作、郑州、开封、平顶山等实验室具备荧光实验室具备荧光PCR检测检测条件，特别是条件，特别是焦作市焦作市可熟练进行荧光可熟练进行荧光PCR检测，并且已检测，并且已作为动物疫病诊断的常规手段。作为动物疫病诊断的常规手段。n固始等县实验室固始等县实验室具备具备PCR检测能力和条件，可熟练进检测能力和条件，可熟练进行行PCR检测，并且已作为动物疫病诊断的常规手段。检测，并且已作为动物疫病诊断的常规手段。一、一、2012年病原学检测工作情况年病原学检测工作情况2、病原学检测的病种明显增加，检测工作流程和病原学检测的病种明显增加，检测工作流程和报告规范性明显提高。报告规范性明显提高。n大部分省辖市实验室开展了大部分省辖市实验室开展了5种重大动物疫病及其他种重大动物疫病及其他疫病疫病PCR病原学检测，为及时发现和排除疫情隐患提病原学检测，为及时发现和排除疫情隐患提供了依据。供了依据。n 大部分省辖市实验室通过实验室考核后，检测流程大部分省辖市实验室通过实验室考核后，检测流程和报告出具规范性明显提高，检测结果准确率明显提和报告出具规范性明显提高，检测结果准确率明显提高。高。二、病原学检测工作存在问题二、病原学检测工作存在问题1、病原学检测病种偏少，样品份数偏少。病原学检测病种偏少，样品份数偏少。n 个别个别省辖市没有开展省辖市没有开展PCR病原学检测或者重大动物疫病病原学检测或者重大动物疫病检测样品不足检测样品不足10份（只有一份检测报告）。份（只有一份检测报告）。n 个别实验室对检测的重大动物疫病病种只有个别实验室对检测的重大动物疫病病种只有1或或2种，不种，不能满足实验室动物疫病检测工作需要，更不能及时发现能满足实验室动物疫病检测工作需要，更不能及时发现疫情隐患。疫情隐患。二、病原学检测工作存在问题二、病原学检测工作存在问题2 2、病原学检测结果不准确。、病原学检测结果不准确。nPCR比对试验结果，比对试验结果，部分省辖市部分省辖市如焦作市、驻马店如焦作市、驻马店市、开封市、济源市、安阳市市、开封市、济源市、安阳市 等达到等达到100%的符合的符合率。个别省辖市只有率。个别省辖市只有33%的符合率。的符合率。nPCR病原学检测不定期抽查工作中，对送检样品进病原学检测不定期抽查工作中，对送检样品进行复核结果存在行复核结果存在不一致不一致。 3、检测报告编制不规范。检测报告编制不规范。n检验方法依据标准不正确。检验方法依据标准不正确。n检验结果明细表填写不规范。检验结果明细表填写不规范。n原始记录电源图不规范。原始记录电源图不规范。 个别地市存在原始记录中电泳图不客观，重复的电个别地市存在原始记录中电泳图不客观，重复的电泳图片用在不同的检测报告中。泳图片用在不同的检测报告中。n没有严格按照检测报告要求进行逐级审核。没有严格按照检测报告要求进行逐级审核。二、病原学检测工作存在问题二、病原学检测工作存在问题三、工作目标三、工作目标1 1、省级省级兽医实验室将兽医实验室将荧光荧光PCR和和PCR诊断技术作为日常动诊断技术作为日常动物疫病诊断的常规手段。物疫病诊断的常规手段。2、省辖市级省辖市级实验室在熟练掌握实验室在熟练掌握PCR诊断技术并将其作为诊断技术并将其作为日常动物疫病诊断的常规手段基础上，加强日常动物疫病诊断的常规手段基础上，加强PCR病原病原学检测的学检测的规范性和准确性，规范性和准确性， 2-3年内全省省辖市级年内全省省辖市级兽医兽医实验室熟练掌握荧光定量实验室熟练掌握荧光定量PCR诊断技术，将其作为日诊断技术，将其作为日常动物疫病诊断的常规手段。常动物疫病诊断的常规手段。 3、省直管试点县及达标晋级示范县级省直管试点县及达标晋级示范县级实验室要熟练掌握实验室要熟练掌握PCR、荧光定量、荧光定量PCR诊断技术，诊断技术，2-3年内年内将其作为日常将其作为日常动物疫病诊断的常规手段。动物疫病诊断的常规手段。1、各级实验室各级实验室专业技术人员通过培训，专业技术人员通过培训，熟练掌握熟练掌握PCR和和/或或荧光荧光PCR检测技术，取得检验合格证。检测技术，取得检验合格证。2、各级加强各级加强实验室建设和仪器配备实验室建设和仪器配备，使其具备开展，使其具备开展PCR和和/或荧光或荧光PCR的条件。的条件。3、省辖市级实验室省辖市级实验室要把要把PCR和荧光和荧光PCR作为疫病诊断常规作为疫病诊断常规手段开展病原学检测。手段开展病原学检测。省直管试点县及达标晋级示范县级省直管试点县及达标晋级示范县级把把PCR或荧光或荧光PCR作为疫病诊断常规手段。作为疫病诊断常规手段。4、各级实验室要提高检测结果的各级实验室要提高检测结果的准确性准确性、加强检测流程和、加强检测流程和报告出具的报告出具的规范性规范性。四、工作要求四、工作要求五、考核要求五、考核要求1、按照积分管理办法要求进行考核，符合要求、按照积分管理办法要求进行考核，符合要求者进行积分。者进行积分。n省辖市及具备省辖市及具备荧光荧光PCR检测能力检测能力，且能正常开展病，且能正常开展病原学检测。原学检测。n省直管试点县（市）、各省辖市所辖县级兽医实验省直管试点县（市）、各省辖市所辖县级兽医实验室具备室具备PCR检测能力检测能力，且能正常开展病原学检测。，且能正常开展病原学检测。n 不定期对省辖市、省直管试点县（市）不定期对省辖市、省直管试点县（市）5种重大动物疫病种重大动物疫病PCR及荧光及荧光PCR检测情况进行抽查。检测情况进行抽查。n 按要求提交按要求提交5种重大动物疫病种重大动物疫病PCR、荧光荧光PCR检测检测报告副报告副本本（每种疫病检测样品不得少于（每种疫病检测样品不得少于30份）和相关凭证者（份）和相关凭证者（留留样样品、原始记录、试剂凭证、电流图样样品、原始记录、试剂凭证、电流图/扩增曲线扩增曲线等）。等）。n 省中心对送检的阳性样品（省中心对送检的阳性样品（5种重大动物疫病均应覆盖在种重大动物疫病均应覆盖在内，检测阳性样品要全部送检）进行内，检测阳性样品要全部送检）进行复核复核。 五、考核要求五、考核要求n按要求提交按要求提交2种以上动物疫病荧光定量种以上动物疫病荧光定量PCR检测检测报告副报告副本本（每种疫病检测样品不得少于（每种疫病检测样品不得少于30份）和相关凭证者份）和相关凭证者（留样样品、原始记录、试剂凭证、电流图留样样品、原始记录、试剂凭证、电流图/扩增曲线扩增曲线等等）。）。n省中心送检的省中心送检的阳性样品阳性样品（2种以上动物疫病均应覆盖在种以上动物疫病均应覆盖在内，检测阳性样品要全部送检）进行复核。内，检测阳性样品要全部送检）进行复核。n考核时根据检测结果的考核时根据检测结果的真实性真实性、材料材料（尤其是检测报（尤其是检测报告）告）齐全、规范性齐全、规范性以及以及样品的符合率样品的符合率进行评定。进行评定。五、考核要求五、考核要求n实现自动化实现自动化n减少人为因素，交叉污染少减少人为因素，交叉污染少n快速快速n高通量高通量n提高了提高了RNA提取效率和纯度提取效率和纯度六、全自动提取核酸的六、全自动提取核酸的优点优点七、荧光七、荧光PCR技术的优点技术的优点n 灵敏度高灵敏度高 比普通比普通PCR最低检出限高最低检出限高100倍。倍。n 快速快速 扩增片段小，反应时间短。扩增片段小，反应时间短。n 高通量高通量 一次可以在线检测一次可以在线检测96份样品，份样品，适用于批量检测。适用于批量检测。n 避免交叉污染避免交叉污染 封闭反应，不需进行电封闭反应，不需进行电泳检测。泳检测。n 直观直观 在线实时检测，避免人为判断。在线实时检测，避免人为判断。八、荧光定量八、荧光定量PCR仪仪