沉降菌检测标准操作规程.docx

沉降菌检测标准操作规程1方法概述：本测试方法采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度。2所用的仪器和设备2. 1高压消毒锅使用时应严格按照仪器说明书操作。2. 2恒温培养箱必须定期对培养箱的温度进行校验。2.3 培养皿一般采用90nX1511Hn的硼硅酸玻璃培养皿。2.4 普通肉汤琼脂培养基的准备及灭菌见附件A3测试步骤3. 1采样方法将已制备好的培养皿，按洁净室沉降菌采样点布置图的要求放置，打开培养皿盖，使培养基面暴露30分钟（静态），再将培养皿盖盖上后倒置。3. 2培养32.1全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。3. 2.2在30。035。C培养箱中培养，时间不少于48h。4. 2.3每批培养基应有对照试验，检验培养基本身是否污染。可每批选定3只培养皿作对照培养。3.3菌落计数1. 3.1用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点计，然后用5T0倍放大镜检查，看是否有遗漏。3. 3.2若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。4注意事项3.1 测试用具要作灭菌处理，以确保测试的可靠性，准确性。4. 2采取一切措施防止人为对样本的污染。4.1 对培养基、培养条件及其他参数做详细的记录。4.2 由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别，必要时用显微镜鉴别。4.3 采样前仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质，破损或污染的应剔除。5测试规则4.4 沉降菌检测前，被检测洁净室（区）的温湿度须达到规定的要求，静压差、换气次数、空气流速控制在规定值内。5.1.2沉降菌检测前，被检测洁净室（区）已经过消毒。5. 1.3测试状态有静态和动态两种，测试状态的选择必须符合生产的要求，并在报告中注明测试状态。5. 2测试人员5.2. 1测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服。5.2.2静态测试时，室内测试人员不得多于二人。5. 3测试时间5.3. 1对单向流，测试应在净化空调系统运行不少于15min后开始。5.3.2对非单向流，测试应在净化空调系统正常运行不少于30min后开始。5.4沉降菌计数5.4.1采样点数目及其布置最少采样点数目如下表面积洁净度级别m2ABCD<102-32-32210-<20552220-<50882250-<100161652100-<2005050103注：表中的面积，对于单向流洁净室，是指送风面面积。对于非单向流洁净室是指房间的面积。在满足最少测点数的同时，还宜满足最少培养皿数见下表洁净度所需90mm培养皿数（以沉降30分钟级别计）A、B14C2D2采样点的布置工作区采样点的位置离地O.8m-L5m左右（略高于工作面）。可在关键设备或关键工作活动范围处增加采样点。采样点位置的详细规则见附件Bo房间采样点超过10个点，每7天对所有采样点轮流监测一次。5. 5记录监测记录中应记录房间温度、相对湿度、测试状杰。5.6结果计算5.6.1用计数方法得出各个培养皿的菌落数。5. 6.2平均菌落数的计算，见式（1）。式式中：m平均菌落数；mil号培养皿菌落数；m22号培养皿菌落数；mnn号培养皿菌落数；N培养皿总数。5.7结果评定标准：静态:洁净度级别A、B级微生物（沉降菌）最大允许数洁净度级别D级微生物（沉降菌）最大允许数个/皿个/皿O5C级3注：表中各数值均为平均值。5.7.1洁净室（区）内的平均菌落数必须低于所选定的评定标准。5.7.2若某洁净室（区）内的平均菌落数超过评定标准，则必须对此区域先进行消毒，然后重新采样两次，测试结果均须合格。6附件6. 1附件A：培养基的准备及灭菌7. 1.1培养基的准备培养基应购买国家认可的培养基。8. 1.2培养基平皿的制备6.1.2.1将90mm的培养皿置于121湿热灭菌20min或160干热灭菌2ho6.L2.2将培养基加热熔化，冷至55时，在无菌操作要求下将培养基注入培养皿，每皿约15mL。6.1.2.3待琼脂凝固后，将培养基平皿倒置于30oC-35oC恒温培养箱中培养48h,若培养基平皿上确无菌落生长，即可供采样用。6.L2.4注：制备好的培养基平皿宜在2X>8°C的环境中存放。6.2附件B：采样点布置洁净区采样点的布置力求均匀，避免采样点在某局部区域过于集中，某局部区域过于稀疏。