寒地野生大豆种质资源超低温保存技术规程.docx

寒地野生大豆种质资源超低温保存技术规程1范围本标准规定了寒地野生大豆种质资源超低温条件下保存技术的术语和定义、储藏温度、环境湿度、种子准备、包装容器选择、维护管理等。本标准适用于野生大豆种质资源的超低温长期保存。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB4404.2粮食作物种子豆类GB4407.2经济作物种子标准GB19489-2004生物安全通用要求GB/TL1-2000标准的结构和编写规则术语和定义下列术语和定义适用于本文件。超低温保存在液氮液相（T96C）或液氮雾相（T50°C）中对生物器官、组织或细胞等材料进行长期保存。其原理是植物材料的代谢和生长活动在超低温条件下几乎完全停止，因此能够有效保持材料的遗传稳定性，同时又不会丧失其形态发育的潜能。寒地野生大豆寒地野生大豆是指分布于我国北纬45°以北地区的野生大豆，这一地区的特点是，冬季严寒时间较长，夏季短暂、温度较低，无霜期90-145天。4超低温保存技术内容与程序超低温保存由准备工作、种质编号、种子干燥、种子包装、入库储藏、资料归档和运行管理六部分组成。4.1准备工作仪器工具进行种子解剖、脱水、含水量测定和种子活力检测的仪器与工具等，如医用剪刀、镜子、培养皿等。普通冰箱普通低于-20°C的冰箱或冰柜和-80°C的冰箱，种子储藏前预处理用。液氮罐液氮储藏罐、操作罐和专用运输罐等一般液态氮冷冻罐，具有真空双壁层，使装入罐内的液态氮在大气压力下保持做大限度绝缘。4.2种子资源编号填写种质资源数据信息表将种质资源编写统一编号并填写信息表。编目基本信息包括全国、省内统一编号、名称、保存单位、保存单位编号、采集地、学名、备注等。4.3种子清选剔除那些受病害感染或者没有生活力的种子，以及混杂的其他材料，以保证入库保存种子有较高的质量、纯度与净度。4.4活力检测采用发芽试验法测定种子活力，初始发芽力检测用种量可采用75150粒，34个重复（每个重复2550粒）。发芽势和发芽率计算公式如下：种子发芽势（%）二发芽初期（规XX期内）正常发芽粒数/供试粒数XlOO种子发芽率（）二发芽终期（规XX期内）正常发芽粒数/供试粒数X100入库发芽率标准。野生大豆材料不低于50%。4.5种子干燥采用热空气干燥法干燥种子，将种子含水量降至8%,但要求干燥温度不能超过40C。4.6种子包装包装容器种子包装采用铝箔袋容器，原料规格为IOUm厚的铝箔和60um厚的聚乙烯。4. 6.2种子包装包装间应保持在温度2325C、相对湿度40%以下，每批处理种子需在3h内包装完毕，将铝箔袋封装机调节至50OhPa气压下密封。包装种子之前，必须逐个检查包装袋密封性能是否完好，核对所包装种子是否与包装容器上种子名称及编号一致，并对对种子重量和粒数等数据进行自动采集。4.7入库贮藏预降温处理采用逐级降温法在保存材料在0预处理后，逐级通过零下温度，在-10、-20、-30>-40°C每级温度处理停留10min.,4.7.2液氮超低温保存将经过降温处理后的材料投入液态氮中（-196°C）中，皤体不密封，保证保存期间液态氮能够深入容器内。4. 7.3贮藏管理管理人员依据种质所占的库位号，通过计算机排列出库号与库位号的对应图，称为种子入库贮藏定位图。定位之后，记录该批入库存放的种质份数和时间，将入库种子的库位号输入管理数据库并记录存档。4.8低温贮藏库运行管理种子生活力检测对入库贮藏种子的生活力按国家库最低标准的要求,初始生活力低于规定标准的，需重新繁种入库。国家库检测种子生活力主要是采用标准发芽试验，主要通过测得准确的发芽势和发芽率，按上述操作进行。4.8.2监测预警根据监测生活力计算出其存活的种子数量，从而根据存活保存数量标准来判断是否应该更新。寒地野生大豆可采用序列发芽测定法，该法每次测定用种量为2040粒，通过分析指标以便种质库管理者做出预测或决策，如决策保存种子生活力的监测频率，以避免保存种子的生活力已降至更新临界值以下。4.8.3供种分发中期库向使用者提供种质样品时，需附上该份样品的背景信息，如基础信息、管理信息及评价鉴定信息。管理人员应把种质分发地点、时间、数量，接受者姓名、地址，包装方式，运输方式及所提供的背景资料等数据及时登记入档案本并输入管理数据库。4.9信息处理与汇编种质信息包括基本信息、鉴定评价信息和管理信息等。种子接纳登记和出库后，必须及时把资料登记入档案本或输入计算机管理数据库。