GB_23200.56-2016 食品安全国家标准 食品中喹氧灵残留量的检测方法.docx

ICS 65.100G 25GR中华人民共和国国家标准GB23200.562016食品安全国家标准食品中嗤氧灵残留量的检测方法NationalfoodsafetystandardsDeterminationofquinoxyfenresidueinfoods2017-06-18实施2016-12-18发布中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会中华人民共和国农业部发布国家食品药品监督管理总局本标准按照GB/TL12009给出的规则起草。23192009相本标准代替SN/T23192009进出口食品中瞳氧灵残留量检测方法。与SN/T比，主要变化如下：标准文本格式修改为食品安全国家标准文本格式；标准名称中“进出口食品”改为“食品”；一标准范围中增加“其他食品可参照执行”。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：SN/T23192009o食品安全国家标准食品中睫氧灵残留量的检测方法1范围本标准规定了食品中唾氧灵残留量的液相色谱与液相色谱一质谱/质谱的检测方法。本标准适用于大豆、花椰菜、樱桃、木耳、葡萄酒、茶叶、蜂蜜、猪肝、鸡肉、鳗中噬氧灵残留量的测定和确证。其他食品可参照执行。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB2763食品安全国家标准食品中农药最大残留限量GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3 原理试样中残留的瞟氧灵采用乙酸乙酯振荡或饱和碳酸氢钠溶液一乙酸乙酯提取，NH2固相萃取小柱净化或凝胶渗透色谱结合NHz固相萃取小柱净化，液相色谱仪或液相色谱一质谱/质谱仪检测及确证，外标法定量。除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682中规定的一级水。4.1试剂4.1.1正己烷(CeHjo):色谱纯。4.1.2乙酸乙酯9/8。2)：色谱纯。4.1.3乙腾(CH3CN):色谱纯。4.1.4甲醇(CH3OH):色谱纯。4.1.5环己烷(CJl):色谱纯。4.1.6丙酮(卬%0)：色谱纯。4.1.7碳酸氢钠(NaHCo3).4.1.8无水硫酸钠（NazSOj：使用前于650C干燥4h,密封保存。4.2 溶随制4.2.1 环己烷一乙酸乙酯溶液（1+1,体积比）：分别量取50mL环己烷与乙酸乙酯，混匀。4.2.2 5%丙酮一正己烷溶液：移取5mL丙酮于95mL正己烷中，混匀。4.2.3 50%乙月青一水溶液：分别量取50mL乙月青与50mL水，混匀。4.2.4 饱和碳酸氢钠溶液：称取一定量碳酸氢钠溶于水溶液中至饱和。4.3除氧灵标准物质（英文名QUinoXyfen,分子式Ci5H8C2FNO,CAS号：124495-18-7,相对分子质量308.14):纯度98%°4.4 标准溶液配制4.4.1 喋氧灵标准储备液(100mg/L):准确称取0.01Oog喳氧灵标准物质，用甲醇溶解并定容至100mU该标准储备液于4可保存3个月。4.4.2 喳氧灵标准工作液：根据需要取适量标准储备液，以50%乙睛水溶液稀释成适当浓度的标准工作液。标准储备液于4可保存1个月。4.5 材料4.5.1 级基(NHz)固相萃取柱：3mL500-mg<.4.5.2 滤膜：0.45m,0.22m,有机相。5仪器和设备5.1 液相色谱仪，配紫外或二极管阵刎检测器。5.2 液相色谱一质谱/质谱联用仪，配电喷雾(ESP)源。5.3分析天平：感olgo0001g5.4 凝胶渗透色谱。55离心机：4500.有10OmL的具塞塑料离心管。5.6 粉碎机，5.7 组织捣碎机。5.8 涡旋振荡器5.9超声波清洗器5.10固相萃取装罩5.11氮吹仪。6试样制备与保存6.1 取样部位性口如口加/、比DV63的规定执行。在取样和制样过程中，应防止样品受到污染或发生残留样品取样部位按CeB物含量的变化。6.2 试样制备6.2.1 水果蔬菜类取有代表性样品50Og,将其切碎后(不可水洗)，用组织捣碎机将样品加工成浆状，混匀，分成2份,装入洁净容器内，密封并标识。6.2.2 茶叶、粮谷与坚果类取有代表性样品500g,用粉碎机粉碎并通过2.Omm圆孔筛，混匀，分成2份，装入洁净容器内，密封并标识。6.2.3 肉及肉制品取有代表性样品500g,切碎后用组织捣碎机将样品加工成浆状，混匀，装入洁净容器内，分成2份，密封并标识。6.2.4 »»取有代表性样品500g,对于无结晶的蜂蜜样品，将其搅拌均匀。对有结晶的样品，在密闭情况下，置于不超过60C的水浴中温热，振荡，待样品全部融化后搅匀，迅速冷却至室温，分成2份，装入洁净样品瓶中，密封并标识。625Wh将取得的全部原始样品倒入洁净的混样桶中，充分搅拌混匀，再将混匀样品分装2份，每份约500mL,密封并标识。&3i*ft茶叶、果酒、蜂蜜、牛奶、粮谷于OC4C保存，蔬菜、水果、肉及肉制品于一18°C保存。77.1 提取7.1.1 茶叶、谷物及坚果等样品称取5g（精确至0.0Ig）试样，置于IoOnlL具塞塑料离心管中，加入15mL饱和碳酸氢钠溶液振摇浸泡Iomin,加入20InL乙酸乙酯，涡动30s后超声提取20min,4500rmin离心3min,移出有机相，残渣再加入20mL乙酸乙酯重复提取1次，合并提取液，经无水硫酸钠干燥后于50C旋转蒸发至近千，加入5mL正己烷，涡动30s溶解残渣，按7.2.2步骤净化。7.1.2 蔬菜与水果样品称取IOg（精确至0.0Ig）试样，置于100nlL具塞塑料离心管中，加入30mL乙酸乙酯，振摇均匀后超声提取20min,4500r/min离心3min,移出有机相，残渣再加入20mL乙酸乙酯重复提取1次，合并提取液，经无水硫酸钠干燥后于50旋转蒸发至近干，加入5mL正己烷，涡动30s溶解残渣，按7.2.2步骤净化。7.1.3 果汁、蜂蜜、葡萄酒等称取IOg（精确至0.0Ig）试样置于25OmL具塞三角瓶中，加入IOmL饱和碳酸氢钠溶液、30mL乙酸乙酯，振摇均匀后超声提取20min,4500r/min离心5min,移出有机相，残渣再加入20mL乙酸乙酯重复提取1次，合并提取液，经无水硫酸钠干燥后于50旋转蒸发至近干，加入5mL正己烷，涡动30S溶解残渣，按7.2.2步骤净化。7.1.4 肉及肉制品称取IOg（精确至0.0Ig）试样置于100mL具塞塑料离心管中，加入IOnlL饱和碳酸氢钠溶液、30mL乙酸乙酯，以均质器于IoOOormin均质提取30s,4500r/min离心5min,移出有机相，残渣再加入20mL乙酸乙酯重复提取1次，合并提取液，经无水硫酸钠干燥后于50°C旋转蒸发至近干，加入10mL环己烷一乙酸乙酯，涡动30s溶解残渣，于4500r/min离心5min,按7.2.1与7.2.2步骤顺序净化。7.2 净化7.2.1 凝胶渗透色谱7.2.1.1 对于7.1.4所得的提取液，取5mL通过样品环注入凝胶色谱柱，按以下条件操作:a）净化柱：Bio-BeadsS-X3填料，25mm（内径）X200mm;b）流动相：环己烷一乙酸乙酯（1+1,体积比）；c）流速：4.2mLmino7.2.1.2收集9.5min2L5min的流出液，50C旋转蒸发至近干，加入5mL正己烷，待固相萃取小柱净化。注：若5.0Qg样品中所含的脂肪量大于Q5g,则应调整样品提取液体积，使得注入凝胶色谱的L样液中所含的脂肪量不大于0.5g。7.2.2固相萃取小柱净化使用前以3疝甲醉、3mL正己烷预淋洗小柱，将样品提取液上柱，用5mL正己烷淋洗，弃去全部淋洗液，以5mL5%丙酮一正已烷洗脱，保持流速约为ImLmin,收集洗脱液，于50C氮吹至近千，以50%乙月青一水溶液定容ImL过0.45m滤膜，供高效液相色谱测定；或以50%乙盾水溶液定容5mL,过0.22Um滤膜，供液相色谱一质谱/质谱测定。7.3 液相色番测定7.3.1 液相色谱参考条件a）色谱柱：WatersSymmetryCiS柱，4.6mm×250mm（内径），膜厚5m,或相当者；b）流动相：乙胞一水（75+25,体积比）；c）流速：LOmLmin;d）检测波长：235nm;e）进样量：40uLo7.3.2 液相色谱测定以喳氧灵标准工作液进样，以峰面积为纵巫标，工作溶液浓度为横坐标绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量。标准下作液和待测样液中瞳氧灵的响应值构应在仪器线性响应范围内。按第8章的规定进行结果计算。在木方法条件下，哇氧灵的保留时间约为8-9位亦准品色谱图参见附录A。7.4 液相色谱一质谱/质谱法测定74.1Sfifeai-a）色谱柱：AcquityUPLCBEEC。柱，2.1Inra（内径）X55mm,膜厚，或相当者；b）柱温：30;c）流动乙懵水（70+30,体积比）；d）流速（Vmin;e）进样10Lo7.4.1 质谱弁考条件a）离子源：电喷雾源（ESI）,正离子模式；b）扫描方式：多反应监测（MRM）;其他参考质谱条任参见下。7.4.2 液相色谱一质谱+质谱测定根据试样中被测物代情况，选取响应值造宜的标准工作液进行色谱分矿。标准工作液和待测样液中瞟氧灵的响应值均应在仪器线性响应范围内。按第8章的规定进行结果计算。在本方法条件下，哇氧灵的保留时间约为1.5min,在锥孔电压为30-V时，标准品的二级质谱图与多反应监测（MRM）色谱图分别参见图C.1、图C.2。7.4 定性测定进行样品测定时，如果检出的色谱峰保留时间与标准样品一致，并且在扣除背景后的样品谱图中，各定性离子的相对丰度与浓度接近的同样条件下得到的标准溶液谱图相比，最大允许相对偏差不超过表1中规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物。表1定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差单位为百分率相对丰度（基峰）>502050（含）1020（含）10允许的相对偏差±20±25±30±507.5 空白实验除不加试样外，均按7.17.4的规定执行。8结果计算和表述用数据处理软件或按式计算试样中瞳氧灵药物的残留量。X-CXy(1)式中：X试样中喳氧灵残留量，单位为毫克每千克(mgkg);c-从标准工作曲线得到的噪氧灵溶液浓度，单位为毫克每升(mgL);V样品溶液最终定容体积，单位为毫升(mL);m最终样液所代表的试样质量，单位为克(g)。计算结果须扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留2位有效数字。9精密度9.1在重复性条件下获得的2次独立测定结果的绝对差值与其算术平均值的比值(百分率),应符合附录D的要求。9.2在再现性条件下获得的2次独立测定结果的绝对差值与其算术平均值的比值(百分率),应符合附录E的要求。10定量!限、回收率10.1 定量限液相色谱法的定量限为0.Olmgkg;液相色谱-质谱/质谱法的定量限为0.OOlmgZkgo10.2 回收率10.2.1当添加水平为0.0Img/kg、0.02mgkg.0.04mgkg时，液相色谱法检测唾氧灵的添加回收率参见表F.110.2.2当添加水平为0.00Inlg/kg、0.005In