血清谷丙转氨酶测定.ppt
血清中谷丙转氨酶的活力血清中谷丙转氨酶的活力测定【目的要求】【目的要求】1.掌握血清谷丙转氨酶活性测定的基本掌握血清谷丙转氨酶活性测定的基本原理。原理。2.熟悉血清谷丙转氨酶活性测定的具体熟悉血清谷丙转氨酶活性测定的具体操作方法。操作方法。3.了解血清谷丙转氨酶活性测定的临床了解血清谷丙转氨酶活性测定的临床意义。意义。原理原理转氨作用转氨作用：将-氨基酸的氨基通过酶促作用转移到-酮基上，生成相应的酮酸与氨基酸的反应。催化这一反应的酶称为转氨酶。转氨酶广泛存在于机体的各种组织中。在肝、心、肾等组织中，谷丙转氨酶（GPT）和谷草转氨酶（GOT）的活性均较高。在正常的新陈代谢过程中，血清内两种酶维持一定水平的转氨酶活性（即正常值）。谷丙转氨酶谷丙转氨酶 glutamic-pyruvic transminase GPT 谷草转氨酶谷草转氨酶 glutamic oxaloacetic transaminase GOT 当肝、心、肾等组织发生病变时，由于组织细胞肿胀、坏死导致大量的酶释放到血流中，从而引起血清谷丙转氨酶（GPT）、谷草转氨酶(GOT)活性显著升高。因此测定这些酶的活性对某些疾病的临床诊断具有重要的参考价值。本试验用丙氨酸和-酮戊二酸为底物(基质液成分)经血清谷丙转氨酶作用生成谷氨酸及丙酮酸。丙酮酸可与起终止和显色作用的2,4二硝基苯肼发生加成反应，生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙，进而在碱性环境中生成红棕色的苯腙硝醌化合物，其颜色的深浅在一定范围内与丙酮酸的生成量，亦即与ALT活性的高低成正比关系。据此与同样处理的丙酮酸标准液相比较，便可算出或通过标准曲线查出血清中ALT的活性。反应过程如下：0COOHC OCH3NO2 H2N HNNO2COOHC CH3NO2 N HNNO2+丙酮酸丙酮酸-2，4-二硝基苯腙二硝基苯腙 棕红色，棕红色，520nm处具特征光处具特征光吸收，颜色深浅（吸收，颜色深浅（OD520值）值）与丙酮酸含量成正比，可据与丙酮酸含量成正比，可据此进行比色测定此进行比色测定。2，4-二硝基苯肼二硝基苯肼COOHC NH2CH3 COOH C O(CH2)2 COOHCOOHC OCH3 COOH C NH2(CH2)2 COOH+谷丙转氨酶谷丙转氨酶AlaGlu-KG丙酮酸丙酮酸King氏法谷丙转氨酶活性单位：每毫升血清在37 与pH7.4的基质液作用60分钟，生成1umol丙酮酸为一个活力单位。临床检验取血清量为0.1，报告数据以100ml血清计算，因此实际侧得结果乘1000即可。实验材料及试剂实验材料及试剂实验材料：动物或人血清实验材料：动物或人血清实验试剂：丙酮酸标准液要求临用前配制实验试剂：丙酮酸标准液要求临用前配制；四、实验操作四、实验操作标准曲线的绘制标准曲线的绘制试剂试剂 管号管号012345丙酮酸丙酮酸标准液，标准液，ml基质液基质液溶液溶液，ml磷酸缓冲液，磷酸缓冲液，ml相当于酶活力卡门氏单位相当于酶活力卡门氏单位0.000.500.1000.050.450.10280.100.400.10570.150.350.10970.200.300.101500.250.250.102002,4-二硝基苯肼二硝基苯肼 ml 0.500.500.500.500.500.5037水浴保温水浴保温 20min 氢氧化钠氢氧化钠 ml5.05.05.05.05.05.0室温下静置室温下静置10min 0 0号管调零，于号管调零，于520nm处测吸光度处测吸光度 GPT活力测定：洁净干燥试管活力测定：洁净干燥试管2支，支，即即测定管、对照管各测定管、对照管各1支支 试剂试剂测定管测定管对照管对照管血清，血清，ml基质液溶液，溶液，ml0.10.5-0.537水浴水浴30min2,4-二硝基苯肼溶液，二硝基苯肼溶液，ml 血清，血清，ml0.5_0.50.137水浴水浴20min0.4mol/L氢氧化钠溶液，氢氧化钠溶液，ml5.05.0室温下静置室温下静置10min，对照，对照管调零，于管调零，于520nm处测吸光度处测吸光度 、标准曲线的制作、标准曲线的制作以表1中的A520为纵坐标，酶活性单位为横坐标，绘制标准曲线。、样品中转氨酶活性的计算、样品中转氨酶活性的计算 根据样品管的A520查标准曲线，即得每100ml血清转氨酶的活性单位数。注意事项注意事项 1.2，4-二硝基苯肼可与有酮基的化合物作用形成苯腙二硝基苯肼可与有酮基的化合物作用形成苯腙 2.吸量应准确，严格控制反应时间和温度。吸量应准确，严格控制反应时间和温度。3.在测定在测定GPT活力时，应事先将底物、血清在活力时，应事先将底物、血清在37水浴水浴中恒温中恒温 4.溶血标本不宜采用，因血细胞内转氨酶活力较高，影溶血标本不宜采用，因血细胞内转氨酶活力较高，影响测定结果。响测定结果。5在测定时，如酶活力较大（大于在测定时，如酶活力较大（大于100单位），应将样单位），应将样品稀释后再进行测定品稀释后再进行测定。
