芸香苷的提取精制水解和鉴定.ppt

LOGO实验二实验二 芸香苷的提取、精制、芸香苷的提取、精制、水解和鉴定水解和鉴定OOOOHHOOHOHGlc-RhaRutinoseLOGO实验二实验二 芸香苷的提取、精制、芸香苷的提取、精制、水解和鉴定水解和鉴定实验原理实验原理：1.芸香苷分子中具有酚羟基，显弱酸性，芸香苷分子中具有酚羟基，显弱酸性，在碱水中成盐增大溶解能力，用碱水为溶在碱水中成盐增大溶解能力，用碱水为溶剂煮沸提取，提取液加酸酸化后又成为游剂煮沸提取，提取液加酸酸化后又成为游离的芸香苷而析出。并利用芸香苷对冷水离的芸香苷而析出。并利用芸香苷对冷水和热水的溶解度相差悬殊的特性进行精制。和热水的溶解度相差悬殊的特性进行精制。2.黄酮苷可通过酸水解得到苷元和糖，并黄酮苷可通过酸水解得到苷元和糖，并可通过薄层色谱法进行检识。可通过薄层色谱法进行检识。实验器材：实验器材：试药：槐花米、试药：槐花米、0.4%0.4%硼砂水溶液、石灰乳、蒸馏硼砂水溶液、石灰乳、蒸馏水、浓盐酸、水、浓盐酸、2%2%硫酸、乙醇、硫酸、乙醇、1%1%氢氧化钠溶液、氢氧化钠溶液、1%1%盐酸溶液、盐酸溶液、10%-10%-萘酚溶液、浓硫酸、镁粉、萘酚溶液、浓硫酸、镁粉、1%1%醋酸镁甲醇溶液、正丁醇、醋酸醋酸镁甲醇溶液、正丁醇、醋酸 仪器：电炉、漏斗、紫外分析仪、锥形瓶、量筒、仪器：电炉、漏斗、紫外分析仪、锥形瓶、量筒、烧杯、层析筒、试管烧杯、层析筒、试管 实验内容与方法：实验内容与方法：一、芸香苷的提取一、芸香苷的提取 取槐花米取槐花米20g20g（研碎），置于（研碎），置于1000ml1000ml圆底烧瓶中，圆底烧瓶中，加加0.4%0.4%硼砂水溶液硼砂水溶液200ml200ml，在搅拌下加石灰乳调，在搅拌下加石灰乳调PH8PH8，加热微沸加热微沸3030分钟，静置几分钟倾出上清液，用棉花分钟，静置几分钟倾出上清液，用棉花过滤，药渣同上重复一次。合并滤液用过滤，药渣同上重复一次。合并滤液用6N6N盐酸调盐酸调 PH2PH23 3，放置冰箱中析晶（一夜以上），待全部结，放置冰箱中析晶（一夜以上），待全部结晶析出，抽滤，得粗芸香苷（滤饼用水洗晶析出，抽滤，得粗芸香苷（滤饼用水洗3 34 4次），次），放置空气中自然干燥得粗品，称重、计算提取率。放置空气中自然干燥得粗品，称重、计算提取率。实验内容与方法：实验内容与方法：二、芸香苷的精制二、芸香苷的精制 取取2g加蒸馏水加蒸馏水400ml，加热煮沸溶解，趁热，加热煮沸溶解，趁热抽滤，滤液放置过夜，析晶，抽滤，得精制抽滤，滤液放置过夜，析晶，抽滤，得精制芸香甙。烘干。芸香甙。烘干。实验内容与方法：实验内容与方法：三、芸香苷的水解三、芸香苷的水解 取精制芸香甙取精制芸香甙1g，置，置250ml圆底烧瓶中，加圆底烧瓶中，加2%H2SO4溶液溶液80ml，加热回流，加热回流30分钟至分钟至1小时，小时，开始加热开始加热10分钟为澄清液，逐渐析出黄色小针状结分钟为澄清液，逐渐析出黄色小针状结晶，即为槲皮素。放冷抽滤得结晶，滤液保留作为晶，即为槲皮素。放冷抽滤得结晶，滤液保留作为糖的检查，沉淀物用蒸馏水洗至中性，抽干水份，糖的检查，沉淀物用蒸馏水洗至中性，抽干水份，晾干称重，得粗制槲皮素。必要时可用稀乙醇重结晾干称重，得粗制槲皮素。必要时可用稀乙醇重结晶。晶。四、芸香苷的检识反应四、芸香苷的检识反应 1成盐反应成盐反应 取芸香甙取芸香甙10mg左右，置试管中加左右，置试管中加蒸馏水蒸馏水2ml，振摇，观察试管有无变化，滴加，振摇，观察试管有无变化，滴加1%氢氢氧化钠溶液数滴，振摇使芸香甙全部溶解成为黄色氧化钠溶液数滴，振摇使芸香甙全部溶解成为黄色澄明溶液，然后再滴加澄明溶液，然后再滴加1%盐酸溶液数滴至成酸性盐酸溶液数滴至成酸性反应，溶液则由澄明转为混浊状态（若当时不出现反应，溶液则由澄明转为混浊状态（若当时不出现混浊时可放置片刻或放置冰箱中冷冻一定时间后再混浊时可放置片刻或放置冰箱中冷冻一定时间后再观察）。观察）。2呈色反应呈色反应 取芸香苷和槲皮素约取芸香苷和槲皮素约10mg，各用，各用5ml乙醇溶解，制成样品乙醇溶解，制成样品溶液，按下列方法进行试验，比较苷元和苷的反应情况。溶液，按下列方法进行试验，比较苷元和苷的反应情况。（1）Molish反应反应 取样品溶液取样品溶液1ml，加，加10%-萘酚萘酚溶液溶液1ml，振摇后斜置试管，沿管壁滴加，振摇后斜置试管，沿管壁滴加0.5ml浓硫酸浓硫酸，静置，静置，观察并记录液面交界处颜色变化。观察并记录液面交界处颜色变化。（2）盐酸镁粉反应）盐酸镁粉反应 芸香甙与槲皮素溶液分别置于试管中，芸香甙与槲皮素溶液分别置于试管中，加入金属镁粉少许，浓盐酸加入金属镁粉少许，浓盐酸23滴，观察并记录颜色变化。滴，观察并记录颜色变化。（3）醋酸镁纸片反应）醋酸镁纸片反应 取两张滤纸条，分别滴两滴芸香苷、取两张滤纸条，分别滴两滴芸香苷、槲皮素的乙醇溶液，然后各加槲皮素的乙醇溶液，然后各加1%醋酸镁甲醇溶液两滴，于醋酸镁甲醇溶液两滴，于紫外灯下观察荧光变化，记录现象。紫外灯下观察荧光变化，记录现象。五、芸香苷及槲皮素的纸层析鉴定五、芸香苷及槲皮素的纸层析鉴定 层析材料：层析滤纸层析材料：层析滤纸 点点 样：（样：（1）提取的芸香苷乙醇溶液）提取的芸香苷乙醇溶液 （2）提取的槲皮素乙醇溶液）提取的槲皮素乙醇溶液 展开剂：正丁醇展开剂：正丁醇 醋酸醋酸 水（水（4 1 5）上层溶液）上层溶液 显色：（显色：（1）先在可见光下观察斑点颜色，然后在）先在可见光下观察斑点颜色，然后在紫外灯下观察斑点颜色紫外灯下观察斑点颜色 （2）喷洒三氯化铝试剂后再观察斑点的变化）喷洒三氯化铝试剂后再观察斑点的变化 实验注意事项实验注意事项 1、提取过程中，加入、提取过程中，加入硼砂硼砂的目的是为了保护芸香苷分子中的目的是为了保护芸香苷分子中邻二酚羟基，以减少其氧化，并使其不与钙离子结合（钙邻二酚羟基，以减少其氧化，并使其不与钙离子结合（钙盐络合物不溶于水），使芸香苷不受损失，提高产率。盐络合物不溶于水），使芸香苷不受损失，提高产率。2、实验中应严格控制碱提取、酸沉淀的、实验中应严格控制碱提取、酸沉淀的PH值。加入石灰值。加入石灰乳即可以达到碱性溶解提取的目的，还可以除去槐花米中乳即可以达到碱性溶解提取的目的，还可以除去槐花米中的多糖类、粘液质等，但碱性不宜过高（的多糖类、粘液质等，但碱性不宜过高（PH不超过不超过10），），因为在强碱性条件下煮沸，时间稍长就可促使芸香苷水解因为在强碱性条件下煮沸，时间稍长就可促使芸香苷水解破坏，降低产率；酸化时破坏，降低产率；酸化时PH不可过低，否则会使芸香苷形不可过低，否则会使芸香苷形成样盐而降低产率。成样盐而降低产率。3、水解时应随时加水，避免蒸干。、水解时应随时加水，避免蒸干。