眼科印迹细胞学检查操作技术.docx

眼科印迹细胞学检查操作技术印迹细胞学(Impressioncytology)检查是一种简单、无创伤、可重复进行的眼表细胞学检查方法，常代替组织活检来了解疾病的进程，是由Egbert等1977年发现并介绍的。一、基本原理当用一种具有微孔的滤膜贴覆于眼表面片刻后，能够得到杯状细胞、上皮细胞和粘蛋白等的印迹，染色后可以观察细胞和蛋白的变化。印迹细胞学技术是用醋酸纤维素滤纸或生物孔膜获取角、结膜细胞标本，经固定染色或行免疫组织化学染色，来研究细胞形态结构等用以早期诊断眼表疾病的可靠方法。其结果与角结膜活检类似，可称为一种简单的活检。二、临床意义(1)主要用于各种干眼病的诊断(敏感度100%、特异性87%)及其病情进展和治疗效果的观察。是诊断干眼病的重要实验室检查方法。(2)用于一些眼病的辅助诊断，如干燥性角结膜炎、春季卡他性角结膜炎、睑缘炎、眼天疱疮、Steven-Johnson综合征、SjOgren综合征(SS)、异位性皮炎、甲亢性眼病等。角膜缘干细胞缺乏症的诊断以角膜表面发现有杯状细胞的存在为依据。（3）观察一些滴眼液、眼部手术或配戴接触镜对眼表的影响。如用0.5%嘎吗洛尔一个月后，结膜杯状细胞显著减少。（4）快速测定眼表病毒感染（HSV、VZV及腺病毒）。（5）眼表面肿瘤的活检病理诊断。三、检查方法1 .表面麻醉O.5%T卡因或倍诺喜5min×2次。2 .取材用镶子将修剪好的4mm×3mm半梯形、孔径为0.025UnI的乙酸纤维素滤膜置于眼表，毛面朝下，轻压四角，10-30秒后揭下，置于含固定液（96%乙醇）的培养槽中。4。C保存至染色。3 .记录记录采集标本的日期、患者姓名、眼别及采集区域。4 .染色目前一般有两种染色方法,Nelson法（即PAS法）和TSeng法。在染色的全过程中，保证滤纸片毛面完全染色。5 .镜下观察和临床评定在光镜下观察杯状细胞密度、上皮细胞核形态、核/浆比例（N/C值）及胞浆颜色等并分级。NeISOn将鳞状上皮化生分为4个级别（1989）,即O级（正常）、1级（轻度）、2级（中度）、3级（重度）。TSeng将结膜上皮鳞状角质化从O到5共分为6级（1987）。四、结果分析Egbert等发现，人类结膜杯状细胞的密度以鼻侧睑结膜为最高，依次递减为颈侧睑结膜、穹隆结膜、睑裂部球结膜。一般认为球结膜中杯状细胞密度小于350个/mm?时即提示眼表异常。几种眼表疾病印迹细胞学特点：1.干眼病病变程度与鳞状化生程度一致，与蛇行染色体细胞的量成正比，与炎症反应程度有关。外源性干眼先影响球结膜及角膜，然后是下睑结膜；内源性干眼睑球结膜同时受累。泪液分泌试验结果与鳞状化生程度无关。2 .干燥性角结膜炎核/浆比及杯状细胞数量自下睑结膜到上球结膜下降，炎性细胞自上球结膜到下睑结膜下降，上球结膜可出现蛇行染色体细胞，严重病变可出现双核、固缩核及无核细胞。3 .眼天疱疮睑缘间结膜、下球结膜核/浆比下降，杯状细胞数下降，下方睑球结膜少量炎性细胞。4 .局部点眼药睑裂间结膜、下球结膜核浆比下降，各区域杯状细胞数下降，下方球睑结膜出现炎性细胞。5 .Sjogren综合征球结膜区及下睑区出现明显的鳞状上皮化生及杯状细胞数下降。出现蛇行染色体细胞、固缩核细胞、双核细胞、无核细胞及炎性细胞。6 .其他维生素A缺乏的早期即能引起结膜干燥、杯状细胞减少和上皮细胞鳞状化生；配戴角膜接触镜患者的结膜印迹细胞学检查结果显示其上皮细胞形态、杯状细胞密度和核染色质均发生了不同程度的改变。五、实用价值近年来，印迹细胞学检查技术范围不仅仅限于组化染色,免疫细胞化学染色、免疫电镜技术及分子生物学技术的应用使其研究范围大大扩大。它不仅能协助诊断干眼病等一些眼表疾病，也可快速测定眼表感染的病毒，还可测定结膜细胞的角蛋白表达、结膜上皮细胞的炎性表达及结膜黏液素的表达等。