第18经典液相色谱法.ppt

第一节第一节 概述概述经典液相色谱法经典液相色谱法：采用普通规格的固定相，常压输送 流动相的液相色谱法称。（如M.Tsweet法）（一）分离原理（二）常用吸附剂（三）色谱条件的选择（二）常用吸附剂（二）常用吸附剂：多孔、微粒状物质 1.硅胶 2.氧化铝 3.聚酰胺吸附能力大小取决于吸附中心的多少吸附中心的多少和吸附中心与被吸附组分形成氢键能力的大小氢键能力的大小结构结构：内部硅氧交联结构多孔结构 表面有硅醇基氢键作用吸附活性中心表面硅醇基存在形式：SiOH游离羟基吸附特性吸附特性1：易吸水失活 105110烘干 0.51h(可逆失水)吸附力最大 活化（活化（P469）：）：铺好的硅胶板自然晾干后，在烘箱中于 105110烘干0.51h的过程 500 烘干(不可逆失水)活性丧失，无吸附力2023-10-31表表18-1 硅胶和氧化铝的含水量与活性的关系硅胶和氧化铝的含水量与活性的关系活性级越大，含水量越多，吸附能力越小，活性越小活性级越大，含水量越多，吸附能力越小，活性越小 活性 活性级 吸附能力 吸水量与极性物质形成氢键物质极性，吸附能力，k，tR 分析酸性或中性物质 2.氧化铝氧化铝 碱性氧化铝 pH 910 适于分析碱性、中性物质 中性氧化铝 pH7.5 适于分析酸性碱性和中性物质 酸性氧化铝 pH 45 适于分析酸性、中性物质3.聚酰胺聚酰胺 氢键作用 氢键能力强，组分越后出柱 1.被测组分性质（极性大小）：被测组分性质（极性大小）：烃 -羧酸，醇 判断物质极性大小的规律：判断物质极性大小的规律：基本母核相同，分子中基团的极性越强，整个分子的极性也越强 分子中双键越多，吸附能力越增，共轭双键多吸附力亦增大化合物基团的空间排列对吸附性也有影响。如能形成分子内氢键的要比不能形成分子内氢键的相应化合物的极性要弱，吸附能力也弱2.吸附剂的活性：吸附剂的活性：吸附剂的活性大，对被测组分的吸附能力强 强极性物质强极性物质选择弱吸附剂选择弱吸附剂 弱极性物质弱极性物质选择强吸附剂选择强吸附剂3.流动相的极性：流动相的极性：流动相极性大，对被测组分的洗脱能力大 “相似相溶相似相溶”原则原则 ：根据组分性质、吸附剂的活性，：根据组分性质、吸附剂的活性，选择适当极性的流动相选择适当极性的流动相 常用的流动相极性递增的次序是：石油醚环已烷四氯化碳苯甲苯乙醚氯仿 醋酸乙酯正丁醇丙酮乙醇甲醇水。续前续前4.4.三者关系图示：三者关系图示：组分 吸附剂 流动相 极性 活性小 极性 非(弱)极性 活性大 非极性或弱极性第三节平面色谱法的分类和参数第三节平面色谱法的分类和参数l分类分类薄层色谱法TLC：吸附薄层色谱法分配薄层色谱法纸色谱法PC:分配色谱法l平面色谱参数平面色谱参数 定性参数比移值Rf 相平衡参数K、k 分离参数分离度R1、定性参数、定性参数l比移值比移值(Rf值值)溶质移动距离与展开剂移动距离之比 Rf=L/L0 （定时展开）（定时展开）L为原点（origin）至斑点中心（质量重心）的距离L0为原点至溶剂前沿（solvent front）的距离 类似保留时间（定距展开）l与组分及色谱条件有关与组分及色谱条件有关 2、相平衡参数、相平衡参数l 分配系数分配系数K=Cs/Cm 容量因子容量因子 k=CsVs/CmVml K、k与与Rf值的关系：值的关系：kR11fff1RRk或smmmsKVVVVKVR/11f讨论讨论 Rf与K有关，即与组分性质（极性）以及吸附剂 和展开剂的性质有关；色谱条件一定，Rf只与组分性质有关，是薄层色谱基本定性参数，说明组分的色谱保留行为fRK,续前 1）K大，Rf小 2）薄层板一定，对于极性组分 展开剂极性大，Rf大（容易洗脱）展开剂极性小，Rf小（不容易洗脱）3）Rf范围：0 Rf 苯极性 根据“相似相溶”原则，B极性大定性分析窄条定量分析1020cm 1 1、铺板：手工或、铺板：手工或用涂布器把浆状的吸附剂均匀地涂在长条形玻璃板上（厚度0.150.5mm）,干燥、活化后即可使用2023-10-312 2、点样、点样:用微量注射器或玻璃毛细管吸取一定量试样点在原点上。试样点的直径一般应小于5mm。可并排点多个试样同时展开3 3、展开：、展开：由一种或多种溶剂按一定比例组成。注意克服边缘效应(预饱和)总结：总结：l制板制板均匀均匀l点样点样集中集中l展开展开预饱和预饱和l显色显色2023-10-31（五）定性和定量分析（五）定性和定量分析 1.定性定性:Rf定位方法定位方法:直接法直接法 254nm紫外灯下观察紫外灯下观察(硅胶硅胶GF254荧光板显紫红色斑点荧光板显紫红色斑点)有些组份在紫外光照射下产生荧光，可在紫外灯下用铅有些组份在紫外光照射下产生荧光，可在紫外灯下用铅 笔将组份斑点描绘出来笔将组份斑点描绘出来 喷洒显色剂、碘蒸气熏或氨水熏等。喷洒显色剂、碘蒸气熏或氨水熏等。2.定量定量(薄层扫描法薄层扫描法)将固定相放在纸上，以纸做载体进行点样、展开、定性、和定量的液-液分配色谱法固定相：纸纤维吸附的水流动相：与水不互溶的有机溶剂（饱和正丁醇）分离机制：液-液分配色谱定性参数：mSfVVKR11一、纸色谱法的实验条件一、纸色谱法的实验条件色谱纸的选择色谱纸的选择 对对Rf值相差很小的化合物，宜采用慢速滤纸值相差很小的化合物，宜采用慢速滤纸 对对Rf值相差较大的化合物，则可用快速滤纸值相差较大的化合物，则可用快速滤纸固定相：固定相：纸纤维吸附的水纸纤维吸附的水纸色谱法的实验条件纸色谱法的实验条件l展开剂的选择展开剂的选择 增加展开剂中极性溶剂的比例量，可以增大Rf值 增加展开剂中非极性溶剂的比例量，可以减少Rf值l常用的展开剂常用的展开剂 水饱和的有机溶剂，如水饱和的正丁醇等l操作步骤操作步骤 点样、展开、显色、定性定量分析 主要内容：主要内容：l比移值比移值Rf及其与及其与K和和k的关系的关系l吸附薄层色谱法：原理，吸附剂、展开剂吸附薄层色谱法：原理，吸附剂、展开剂及其选择及其选择l薄层色谱定性方法薄层色谱定性方法l纸色谱法：原理和实验条件纸色谱法：原理和实验条件