HIV检测技术.ppt

急性期急性期潜伏期潜伏期窗口期窗口期HIV感染以后的血清学动态感染以后的血清学动态Anti-P24Anti-gp41/120(anti-gp36)HIV RNAAnti-Ag感染感染 1周周 2周周 3周周 4周周.1年年 2年年 3年年.10年年.艾滋病期艾滋病期Anti-Ab浓浓度度辅助诊断：在特殊情况下，如出现某些非典型的抗体反应，特别是不确定反应时，RNA的测定可提供有用的证据。感染早期：在HIV感染的窗口期，无法使用抗体检测进行诊断，此时RNA的测定具有特殊的意义，提示是否有感染的可能，但仍需追踪检测HIV抗体，最终根据抗体的检测情况做出诊断。病程监控：帮助确定疾病发展的阶段。指导治疗方案及疗效测定。预测疾病进程4th gen3rd gen=1st-2nd genHIV antigenIgM abIgG abDetection limit=window第一第一/二代试剂检测二代试剂检测IgG抗体，第三代试剂检测抗体，第三代试剂检测IgG、IgM抗体抗体,第四代试剂同时检测第四代试剂同时检测IgG、IgM抗体和抗体和P24抗原使窗口期缩短。抗原使窗口期缩短。酶酶联联 酶联免疫吸附酶联免疫吸附ELISAELISA方法方法 间接法间接法 夹心法双抗原和双抗体夹心法双抗原和双抗体 竞争法竞争法 捕获法捕获法 间间 接接 ELISA 方方 法法 Ag+Ab+Ab-E酶标记抗人IgG标本中的HIV 抗体底物酶产生颜色产生颜色HIV抗抗原原固体载体固体载体双双 抗抗 原原 夹夹 心心 法法 Ag+Ab+Ag-E标本中HIV抗体HIV抗原酶标的HIV抗原 竟 争 ELISA 法 Ag+Ab+Ab-E病人血清底物无色或很微量反应无色或很微量反应酶标酶标抗体抗体HIV抗抗原原产生颜色产生颜色 将抗将抗HIV-McAbHIV-McAb包被固相板中包被固相板中 加入加入HIVHIV特异性特异性AgAg 待检血清标本待检血清标本 酶标酶标Ab/(E标抗人标抗人IgG)底物显色底物显色 抗人抗人IgG 包被固相载体包被固相载体 待检血清标本（总待检血清标本（总IgG）E标记标记HIV 底底 物物 特点：提高敏感性特点：提高敏感性特异性特异性底物经底物经HRP作用后，约作用后，约40分钟显色达分钟显色达顶峰，随即逐渐减弱，至顶峰，随即逐渐减弱，至2小时后即可完全小时后即可完全消退至无色。消退至无色。前滞现象：前滞现象：反应中抗体含量过多，影响抗原抗体的反应中抗体含量过多，影响抗原抗体的理想结合，大量抗体结合于抗原阻碍了理想结合，大量抗体结合于抗原阻碍了交叉联结符合体的形成，使肉眼观察不交叉联结符合体的形成，使肉眼观察不到凝集现象，造成假阴性。到凝集现象，造成假阴性。解决办法解决办法：稀释样品：稀释样品 HIV-1抗体特异带包括：env带 gp160/gp120、gp41；gag带 p55、p24、p17（或p18）；pol带 p66（或p65）、p51、p31。HIV-2抗体特异条带包括：env带 gp140/gp105、gp36；gag带 p56、p26、p16；pol带 p68、p53、p34。（由于使用的毒株不同，HIV-2 env带也可为gp125/gp80、gp36）。1 3 2 4GP160GP120 P66 P55 P51 GP41 P31 P24 P17 血清对照血清对照 P39 HIV-2特异带特异带 分子量分子量 基因组基因组抗原抗原描叙描叙gp160ENVgp41的聚合体的聚合体 宽的离散糖蛋白带宽的离散糖蛋白带gp120ENV外膜蛋白外膜蛋白离散糖蛋白带离散糖蛋白带p66POL反转录酶反转录酶窄带窄带p55GAG前体蛋白前体蛋白窄带窄带p51POL反转录酶反转录酶窄带位于窄带位于p55下面下面gp41ENV横跨膜蛋白横跨膜蛋白离散糖蛋白带离散糖蛋白带p39GAGp55的碎片的碎片窄带窄带p31POL核酸内切酶核酸内切酶双带双带p24GAG核心蛋白核心蛋白宽带宽带p17GAG核心蛋白核心蛋白宽带宽带