人抗狂犬病毒抗体anti-RV酶联免疫分析试剂盒使用说明书.docx

人抗狂犬病毒抗体(anti-RV)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。96T使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中抗狂犬病毒抗体(anti-RV)表达。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人抗狂犬病毒抗体(anti-RV)表达。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，可与样品中抗狂犬病毒抗体(anti-RV)相结合，经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与HRP标记的抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在45Onm波长下测定吸光度(OD值)，与CUTOFF值相比较，从而判定标本中人抗狂犬病毒抗体(anti-RV)的存在与否。试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20mlXl瓶7终止液6mlX1瓶2酶标试剂6mlX1瓶8阳性对照0.5mlXl瓶3前标包被板12孔X8条9阴性对照0.5mlXl瓶4样品稀释液6mlXl瓶10说明书1份5显色剂A液6mlXl瓶11封板膜2张6显色剂B液6mlXl瓶12密封袋1个标本要求1.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20C保存，但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。操作步骤1.编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)2.加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50L然后在待测样品孔先加样品稀释液40l,然后再加待测样品10L加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，3.温育：用封板膜封板后置37C温育30分钟。4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸情水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，柏干。6.加酶：每孔加入酶标试剂50l,空白孔除外。7.温育：操作同3。8.洗涤：操作同5。9.显色：每孔先加入显色剂A50l,再加入显色剂B5Ol,轻轻震荡混匀，37避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50l,终止反应（此时蓝色立转黄色）。11.测定：以空白空调零，45Onm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）.测定应在加终止液后15分钟以内进行。操作程序总结:计算和结果判定：试验有效性：阳性对照孔平均值NL00;阴性对照平均值4）.IO临界值（CUToFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15阴性判定：样品OD值临界值（CUTOFF）者为抗狂犬病毒抗体（anti-RV）阴性阳性判定：样品OD值N临界值（CUTOFF）者为抗狂犬病毒抗体（anti-RV）阳性注意事项1.操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。2.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。3.浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。4.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染5.底物请避光保存。6.试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为63Onm7.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为2M的硫酸，使用时必须注意安全。保存条件及有效期1.试剂盒保存：；2-8C。2.有效期：6个月