慕可-靶点表达体外检测方案.docx

慕可-靶点表达体外检测方案1实验对象：人永生化角质形成细胞HaCaT细胞系2检测样品：样品1（粉末），样品用滤过的无菌水溶解，后用0.22M的细胞滤器过滤3实验方案：3.1细胞培养：根据细胞说明书，培养细胞至P3对数生长期后，点板。稳定培养过夜。3.2细胞活性实验3.2.1采用CCK8检测方法3.2.2根据点板密度点96孔板（周围一圈不点，需加无菌水，只在中间6*10点细胞）,3.2.3分组：3.2.3.1阴性对照组：不加细胞，只加培养基和检测试剂3.2.32空白对照组：细胞+和样品等量的水+培养基+检测试剂3.2.33样品组：细胞+B但等量样品溶液+培养基+检测试剂样品1（粉末）为冻干粉末加水加水加水加水加水加水加水加水加水加水加水加水加水阴性对照三三对照.0.3125mg/ml062Smgmi1.25mgml2.5mgml5mgml1OmgZrnI20mgml40mgml加水加水阴性对照空白对照0.3125mg/ml0-625mgml1.25mgml2.5mgM5mgmlIOmaml20mgml40mgM加水加水阴性对照空白对照0.3125mg/ml0.625mgml!.25mgml2.5mgf11l5mgmlIOmgZmI20mgml4Gmgml加水加水阴性对照空白.叶照0.3125mg/mlO625mgml1.25mgml25mgml5mgmlIQmg/ml20mgml40mgml加水加水阴性对照空白灯照0.3125mg/mlO625mg125mgml25mgr5mgmlIomgzml20mgml4O11gml加水加水阴性对照空白对照0.3125mg/mlO625mgml125mgml25mgml5mgr10mgml20fngml40mgml加水加水加水加水加水加水加水加水加水加水加水加水加水3.2.4根据最终选择的细胞活力检测方案在指定波长检测，得到对应吸光度数据3.3靶点表达实验3.3.1点板：对数生长期细胞点6孔板3.3.2分组：3.3.21空白组：正常加培养基3.3.22样品组：样品13.3.3给药时间:24h3.3.4收样：根据需要收WB的蛋白样品以及PCR的RNA样品3.3.5进行WB以及RT-PCR检测，需包含三个靶点，Keap、Nd2。