疟疾镜检的实验室技术.ppt

疟疾镜检的实验室技术疟疾镜检的实验室技术血片的清洁血片的清洁l新的载玻片必须洗洁净后才可直接浸于新的载玻片必须洗洁净后才可直接浸于 9 5%的酒精中，的酒精中，然后一一取出，用软而洁净并没有棉花毛的细布擦干，然后一一取出，用软而洁净并没有棉花毛的细布擦干，擦亮，妥善放置，勿使灰尘沾污。擦亮，妥善放置，勿使灰尘沾污。l用过的载玻片可用用过的载玻片可用5之煮沸肥皂水洗涤，将玻片一张之煮沸肥皂水洗涤，将玻片一张一张的放入其中待肥皂水稍冷后，用毛刷或纱布细心拭一张的放入其中待肥皂水稍冷后，用毛刷或纱布细心拭擦。再用清水漂洗干净并以纱布擦干，然后浸于擦。再用清水漂洗干净并以纱布擦干，然后浸于 95酒酒精内脱脂，照上述法处理，精内脱脂，照上述法处理，l亦可用洗涤液清洗，在整个擦洗过程中，应注意避免玻亦可用洗涤液清洗，在整个擦洗过程中，应注意避免玻片互相磨擦，而使玻片面磨毛，以致不堪使用。片互相磨擦，而使玻片面磨毛，以致不堪使用。采血的部位和方法采血的部位和方法 l以耳垂采血为主。以耳垂采血为主。l以以75%酒精棉球消毒耳垂待酒精干后，左酒精棉球消毒耳垂待酒精干后，左手拇指和食指紧捏耳垂，右手持一次性采手拇指和食指紧捏耳垂，右手持一次性采血针迅速刺入，适可而止第一滴血不必擦血针迅速刺入，适可而止第一滴血不必擦掉，即可应用。（若由指头取血则受检者掉，即可应用。（若由指头取血则受检者痛楚较大，且易引起创口感染，一投不宜痛楚较大，且易引起创口感染，一投不宜采用。）采用。）采血的血量采血的血量l厚血膜血量约为厚血膜血量约为5立方毫米左右立方毫米左右(即一小滴即一小滴)，涂成边缘光滑之园形，直径约涂成边缘光滑之园形，直径约0.81.0厘厘米左右。米左右。l薄血膜血量只需薄血膜血量只需0.5-1.0立方毫米左右立方毫米左右,过过多则血膜过厚过大。薄膜宜涂成舌状长约多则血膜过厚过大。薄膜宜涂成舌状长约2.5厘米，宽约厘米，宽约2厘米厘米采血的时间采血的时间l进行疟疾普查时，在同一时间内常常需要进行疟疾普查时，在同一时间内常常需要检查很多居民，故一般无法考虑取血的时检查很多居民，故一般无法考虑取血的时间。间。l但在诊断临床的疟疾患者时，就应当考虑但在诊断临床的疟疾患者时，就应当考虑在什么时候取血较为适宜，尤在确定不下在什么时候取血较为适宜，尤在确定不下虫种和查不到疟原虫的疑似疟疾患者的情虫种和查不到疟原虫的疑似疟疾患者的情况下。况下。采血的时间采血的时间-间日疟间日疟l间日疟原虫及三日疟原虫，在患者刚发冷发热以后，大部是在环状滋养体期，故这一时期区别疟原虫种类是不容易的。虽在般情况下，随便什么时间检查感染者的末稍血液，多少能查到各个时期的原虫，但适当的取血时间，一般是在患者发作数小时至十余小时，即已滋养发育至具有易于鉴别的晚期滋养体期采血的时间采血的时间-恶性疟恶性疟l恶性疟原虫，从理论上说，因为恶性原虫的裂体生殖是在内脏的毛细血管内进行的，所以在发作之前，患者的末稍血液中不易查到。但实际情况不尽如此，一般在受染者的末稍血液中，随时能见到少数恶性疟原虫的环状滋养体，l虽然如此，较理想的取血时间，是在发作后的20小时左右，因为这个时候，环状滋养体虽已滋长发育至最高峰，但尚未回至内脏的毛细血管中去进行裂体生殖。l环状滋养体的数量与构造，有助于疟原虫种类的鉴别。恶性疟原虫的配子体很易识别，但在初发时，一般需要在发作八日后才能在末稍血液中出现，应当注意厚、薄血膜的形状和位置厚、薄血膜的形状和位置l薄血膜宽2cm，长2.5cml厚血膜直径0.8-1cml假定将玻片划成三格等分，则厚血膜应位于中格靠右侧线处，薄血膜则从玻片中央起至左格中部止，右端空格供记录姓名，编号或贴标签之用(如图)血片的制作血片的制作1l玻片的执持方法：玻片的执持方法：无论在拭擦玻片，制作血片或染色血无论在拭擦玻片，制作血片或染色血片时，手指仅可夹持玻片两侧缘，切片时，手指仅可夹持玻片两侧缘，切匆触及玻片之上下面以免手上油脂污匆触及玻片之上下面以免手上油脂污及玻片面，使薄血涂布不匀，厚血膜及玻片面，使薄血涂布不匀，厚血膜易于脱落易于脱落血片的制作血片的制作-厚血膜涂制厚血膜涂制l取洁净的载玻片和推片各一张载玻片放桌上，取洁净的载玻片和推片各一张载玻片放桌上，推片以右手拇指和食指持其二侧，以左端下角推片以右手拇指和食指持其二侧，以左端下角从受检者之耳垂沾取血滴，在载玻片之适当位从受检者之耳垂沾取血滴，在载玻片之适当位置，置，自内向外回转扩大，涂成厚血膜，使厚薄自内向外回转扩大，涂成厚血膜，使厚薄均匀。涂毕后用干棉球拭掉推片上和耳垂上之均匀。涂毕后用干棉球拭掉推片上和耳垂上之残留小量血液。残留小量血液。血片的制作血片的制作-薄血膜涂制薄血膜涂制l以推片左端中央沾取薄血膜所需之血，与载玻以推片左端中央沾取薄血膜所需之血，与载玻片约成片约成25一一45度角，使血滴向二旁扩展至一定度角，使血滴向二旁扩展至一定宽度时，立即向左边轻轻迅速推出即成薄血膜。宽度时，立即向左边轻轻迅速推出即成薄血膜。推时速度之快慢和角度均影响血膜的厚薄程度，推时速度之快慢和角度均影响血膜的厚薄程度，最理想的薄血膜是一层血细胞，血细胞的分布最理想的薄血膜是一层血细胞，血细胞的分布排列比较均匀。无裂缝，无空隙。排列比较均匀。无裂缝，无空隙。血片的编号血片的编号l血片编号可根据实际操作进行。l号码必须不易脱落，建议用铅笔在薄血膜上编号。血片的固定和脱膜血片的固定和脱膜l薄血膜用甲醇固定薄血膜用甲醇固定l现场检查的血片厚血膜可以不脱血膜，现场检查的血片厚血膜可以不脱血膜，直接染色。直接染色。l保存时间较长的标本片厚血膜要脱血保存时间较长的标本片厚血膜要脱血膜后保存。膜后保存。血片制作的注意事项血片制作的注意事项l平放、平放、有盖、有盖、防止灰、尘和植物防止灰、尘和植物孢子污染。孢子污染。l防止苍蝇、蟑螂等昆虫吮吸防止苍蝇、蟑螂等昆虫吮吸l自然干燥，不能太阳晒和火烤自然干燥，不能太阳晒和火烤制作血片的注意事项制作血片的注意事项l制成的血片切勿用火烤、日晒或放在新购置之标本盒内，以免血红制成的血片切勿用火烤、日晒或放在新购置之标本盒内，以免血红蛋白凝固无法脱除。血片放置待干时不可倾斜，否则厚血膜中血细蛋白凝固无法脱除。血片放置待干时不可倾斜，否则厚血膜中血细 胞沉在一边，可使厚薄不匀。此外还要防止苍蝇吮吸血膜和灰尘污胞沉在一边，可使厚薄不匀。此外还要防止苍蝇吮吸血膜和灰尘污染血片。染血片。l 制成的血膜须完全干燥后制成的血膜须完全干燥后(自然情况下约自然情况下约4-12小时才能全干燥；必小时才能全干燥；必要时，可置于要时，可置于3 7的暖箱中，促其速干的暖箱中，促其速干)始可进行固定及染色否则始可进行固定及染色否则薄血膜中的红细胞边缘皱缩，厚血膜容易在染色时脱落，而常现网薄血膜中的红细胞边缘皱缩，厚血膜容易在染色时脱落，而常现网状的背景；反之；血片搁置过久则有霉菌及枯草杆菌生长，血红蛋状的背景；反之；血片搁置过久则有霉菌及枯草杆菌生长，血红蛋白凝固，也不能使用，因此不利于镜检。白凝固，也不能使用，因此不利于镜检。l若把未经固定的血片能盛于氯化钙的干燥器内，然后放入冰箱中，若把未经固定的血片能盛于氯化钙的干燥器内，然后放入冰箱中，可保存可保存3年之久，并仍可较满意的染色。年之久，并仍可较满意的染色。血片的染色血片的染色l吉氏染液的成份吉氏染液的成份l原料：吉氏染粉原料：吉氏染粉 10 g 中性甘油中性甘油 500 ml 纯甲醇纯甲醇 500 ml吉氏液染色方法吉氏液染色方法l将吉氏染液配成将吉氏染液配成3%的稀释液的稀释液l水水97 ml +3 ml吉氏液吉氏液 lPH7.0-7.2l染色染色2530分钟分钟影响染色效果的因素影响染色效果的因素l染料和溶剂的质量染料和溶剂的质量l染液的新旧染液的新旧l染液稀释后的使用时间染液稀释后的使用时间l染液的稀释浓度染液的稀释浓度l染色时间：根据染液质量、新旧、浓度和气温染色时间：根据染液质量、新旧、浓度和气温l染色用水染色用水PH7.07.2