肾上腺素能受体阻滞剂普萘洛尔对骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响.docx

肾上腺素能受体阻滞剂普蔡洛尔对骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响李锦琼I仝琳鸽2,李永萍I,张秋蓉'1 .大理大学第一附属医院血液科，云南大理6710002 .大理大学基础医学院生理学与病理生理学教研室，云南大理671000；【摘要】目的：研究肾上腺素能受体阻滞剂普蔡洛尔对人多发性骨髓瘤U266细胞珠增殖和凋亡的影响，探讨其在抑制多发性骨髓瘤中的潜在作用。方法：首先，收集大理大学第一附属医院2017年10月T2月14例初诊多发性骨髓瘤患者及5例健康发热患者骨髓病理标本作为病例组和对照组，应用免疫组化法分别检测两组骨髓样本中B2-AR的表达情况；其次，根据普蔡洛尔的浓度梯度，将96孔板中处于对数生长期的U266细胞分为1、10、20、50、100、200,400mol/L组，分别干预24h、48h和72h,对照组不加普蔡洛尔，利用CCK8法检测各组细胞的增殖活性，分析普蔡洛尔对U266细胞增殖的影响；另外，应用100,200molL普蔡洛尔分别干预对数生长期的U266细胞48h,对照组不加普蔡洛尔，RT-qPCR法检测U266细胞Bax、Bcl-2、CaSPaSe-3mRNA水平，用于分析普蔡洛尔对U266细胞凋亡的影响。结果：病例组和对照组骨髓组织中的浆细胞均表达B2-AR,其中病例组3例中等阳性(+，11例强阳性(+),对照组5例均弱阳性(+),病例组的表达显著高于对照组(Z=-3.65),差异有统计学意义(PSOJ):普蔡洛尔可显著抑制U266细胞增殖活性，抑制作用随药物作用时间的延长和浓度的增加而增强，差异均有统计学意义(PS05)：200mol/L普蔡洛尔组BCl-2、Bax、CaSpaSe-3的InRNA水平均显著高于对照组,分别为(2.93±0.31,1.00±0.11)、(6.37±0.24,1.00±0.03)和(2.44±0.71,1.00±0.06),差异有统计学意义(P<OlP<0.05),而100molL普蔡洛尔组仅有Bc2的mRNA水平显著高于对照组(2.94±0.6,1.00±0.11),差异有统计学意义(P<0.05)。结论：B2-AR在多发性骨髓瘤骨髓组织中表达升高，普蔡洛尔能抑制多发性骨髓瘤细胞的增殖并促进其凋亡相关蛋白的转录，这可能是普蔡洛尔抗多发性骨髓瘤的相关作用机制之一。【关键词】多发性骨髓瘤；肾上腺素受体；普蔡洛尔；细胞增殖；细胞凋亡【中图分类号】：R551【文献标识码】：AEffectsofadrenergicreceptorblockerpropranololonproliferationandapoptosisofmyeloaongLiifLingeTonfYongpingLi1,QiurongZhang.7.DepartmentofHematologytFirstAffiliatedHospitalofDaliuniversity,YunnanDali,671000fChina;2,DepartmentofPhySiOIOgyandPathophysiology,SchoolofBasicMedicine,Daliuniversity,YunnanDali,671000rChina【Abstract】Objective：Tostudytheeffectsofpropranolol,anadrenergicreceptorblocker,onproliferationandapoptosisofhumanmultiplemyelomaU266cellline,andtoexploreitspotentialroleininhibitingmultiplemyeloma.Methods：Firstly,bonemarrowpathologicalsamplesof14newlydiagnosedmultiplemyelomapatientsand5healthyfebrilepatientsfromtheFirstAffiliatedHospitalofDaliUniversitywerecollectedascasegroupandcontrolgroupfromOctobertoDecember2017.ImmunohiStochemistrywasusedtodetecttheexpressionof2ARinbonemarrowsamplesofthetwogroups.Secondly,accordingtotheconcentrationgradientofpropranolol,theU266cellsatlogarithmicgrowthstagein96-wellplateweredividedinto1,10,20,50,100,200and400mol/Lgroupsfor24h,48hand72h,respectively.Thecontrolgroupwasnotaddedpropranolol.TheproliferationactivityofcellsineachgroupwasdetectedbyCCK8method,whichusedtoanalysistheproliferationeffectsofpropranololontheU266cells.Inaddition,100mol/Lpropranololand200mol/LpropranololwereusedtointervenewithU266cellsatlogarithmicgrowthstagefor48h,andthecontrolgroupwasnotgivenpropranolol.ThemRNAlevelsofBax,BCI-2andCaspase-3inU266cellsweredetectedbyRTqPCRtoanalyzetheeffectofpropranololonapoptosisofU266cells.Results：TheplasmacellsofthebonemarrowtissuesofboththecasegroupandthecontrolgroupexpressedB2-AR,amongwhich3casesinthecasegroupweremoderatelypositive(+),11caseswerestronglypositive(+),and5casesinthecontrolgroupwereweaklypositive(+).TheexpressionofB2ARinthecasegroupwassignificantlyhigherthanthatinthecontrolgroup(Z=-3.65),thedifferencewasstatisticallysignificant(P<0.05).PropranololcouldsignificantlyinhibittheproliferationactivityofU266cells,andtheinhibitoryeffectwasincreasedwiththeextensionofdrugtreatmenttimeandtheincreaseofdrugconcentration,withstatisticalsignificance(P<0.05).ThemRNAlevelsofBcl-2,BaxandCaspase-3in200口mol/Lpi'opranololgroupweresignificantlyhigherthanthoseincontrolgroup,whichwere(2.93÷0.31,L00±0.11),(6.37÷0.24,1.00÷0.03)and(2.44±0.71,1.00÷0.06),respectively.ThemRNAlevelofBci2in100mol/Lpropranololgroupwassignificantlyhigherthanthatincontrolgroup(2.94÷0.6,1.00±0.11,P<0.05),andthedifferencewasstatisticallysignificant(P<0.05).Conclusions:Theexpressionof2ARisincreasedinthebonemarrowtissueofmultiplemyeloma.Propranololcaninhibittheproliferationofmultiplemyelomacellsandpromotethetranscriptionofapoptosis-relatedproteins,whichmaybeoneoftherelatedmechanismsofpropranololagainstmultiplemyeloma.【Keywords】Multiplemyeloma；Adrenergicreceptor；Propranolol；Cellproliferation;Cellapoptosis多发性骨髓瘤(Multiploinyoloma,MM)是血液系统B淋巴细胞恶性增殖性疾病，发病率占血液系统肿瘤疾病的10%T5%,占所有恶性肿瘤死亡率的1%,目前仍然是一种不可治愈的疾病3。MM的主要发病机制是骨髓中浆细胞的异常克隆性增生，分泌大量单克隆免疫球蛋白，免疫球蛋白片段沉积或侵犯相应组织及器官，导致其器官及组织的损伤，引起骨质破坏、贫血、反任的感染、肾功能损伤等一系列临床表现。MM的发病率及死亡率呈逐年增高的趋势，其在个体间的自然病程有很大差异，从数月到超过数十年不等，治疗效果差异性大。因此对MM患者进行准确的病情和预后评估，选择有效的个体化化疗方案，对延长患者的生存时间具有重要意义。2肾上腺素能受体(B2-adrenergicreceptor,2-AR)广泛存在于心脏、骨髓、呼吸道等组织器官。研究表明B2-AR激活后能促进肿瘤转移、粘附、侵袭及转移，诱导肿痛细胞凋亡逃逸等"，而B2-AR阻滞剂能够抑制肿瘤细胞的增生、促进肿痛细胞凋亡、减弱肿瘤转移及浸润等"。细胞增箔和凋亡紊乱是肿瘤发生、发展的主要病理生理基础之一，B细胞淋巴痛因子2(BCI-2)、Bcl相关蛋白(BaX)是细胞凋亡的重要信号分子，可激活半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(CaSPaSe-3)、CaSPaSe-9,促进细胞凋亡ClL普蔡洛尔是一种非选择性B受体阻滞剂，临床上广泛应用于高血压和预防心绞痛等疾病的治疗，其是否能够通过抑制多发性骨髓痛组织中的B2-AR进而抑制骨髓瘤细胞的进展，目前尚不清楚。因此，本文通过检测MM骨髓组织中B2-AR的表达水平，研究普蔡洛尔对人多发性骨髓瘤细胞株U226增殖及凋亡的影响，探讨其在防治多发性骨髓瘤中的相关机制。1材料与方法1.1 材料来源选择2017年10月-12月大理大学第一附属医院收治的14例多发性骨髓瘤患者骨髓样本和同期5例健康发热患者骨髓样本（均经骨髓细胞学及病理组织学证实骨髓无异常）作为病例组和对照组两组患者的骨髓石蜡标本均从我院病理科档案库获取，所有患者完善骨髓穿刺及病理检查前均签署知情同意书。1.2 细胞系人多发性骨髓痛U266细胞株购自武汉普诺赛生命科技有限公司。在37、5%Ca悬浮培养于含10%胎牛血清、遇青链霉素混合液的RPMI-1640培养液中，细胞长满70%-80%时进行传代，取对数生长期细胞进行实验.1.3 主要试剂与仪器胎牛血清、RPMl-1640培养液（以色列Bl公司），普蔡洛尔（美国MedChemEXPreSS公司）美托洛尔（上海麦克林生化科技有限公司），CellCountingKit-8细胞增殖毒性检测试剂盒（日本DOjindo）,FastPureCel1/TissueTotalRNAIsolationKit、HiSc