分子病理检测在神经肿瘤治疗中的应用.ppt

无血管内皮细胞被覆的、无血管内皮细胞被覆的、由细胞外基质界限的管腔，由细胞外基质界限的管腔，称为血管生成拟态（称为血管生成拟态（VMVM）。）。注意注意:控制控制DNA量量（DNA量过多假量过多假阳性；阳性；DNA量过量过少假阴性）少假阴性）DNA样本提取样本提取(石蜡切片、组织、石蜡切片、组织、外周血外周血)阴性对照阴性对照正常外周血基因组正常外周血基因组DNA阳性对照阳性对照甲基化基因组甲基化基因组DNADNA亚硫酸氢盐转化亚硫酸氢盐转化Me-C Me-C C UPCR仪仪凝胶电泳凝胶电泳电泳半定量图像分析电泳半定量图像分析问题问题对于甲基化较对于甲基化较多的多的PCR产物，产物，GC含量高，含量高，Tm值较高值较高甲基化的胞嘧啶（甲基化的胞嘧啶（C）胸腺嘧啶（胸腺嘧啶（T）甲基化的胞嘧啶（甲基化的胞嘧啶（C C）未甲基化的胞嘧啶（未甲基化的胞嘧啶（C C）基因组基因组DNA亚硫酸氢钠修饰处理亚硫酸氢钠修饰处理GC含量变化含量变化熔解曲线熔解曲线 Tm 值变化值变化DNA样本提取制备样本提取制备(石蜡切片、组织、石蜡切片、组织、外周血外周血)甲基化阳性对照甲基化阳性对照/非甲基化阴性对照非甲基化阴性对照（100、50、25、6.2、1.5、0.4、0%）DNA亚硫酸氢盐转化亚硫酸氢盐转化Me-C Me-CC U注意注意:控制控制DNA量量（DNA量过多假阳性；量过多假阳性；DNA量过少假阴性）量过少假阴性）对于甲基化较多的对于甲基化较多的PCR产物，产物，GC含含量高，量高，Tm值较高值较高实时荧光实时荧光PCR仪仪利用利用HRM软件软件注：检测方法注：检测方法1分别使用两组探针：分别使用两组探针：1)1p36/1q21：1p36标记为红色，标记为红色，1q21标记为绿色；标记为绿色；2)19q13/19p13：19q13标记为红色，标记为红色，19p13标记为绿色。标记为绿色。2经重复实验，随机计数细胞数量（经重复实验，随机计数细胞数量（200个左右），统计红绿荧光信号比值（个左右），统计红绿荧光信号比值（Ratio）。）。图1 1p36/1q21图2 19q13/19p13总结总结