血凝实验真菌检查法.ppt

第五次实验第五次实验 1 1、血凝试验、血凝试验（1 1份份/人）人）2 2、真菌检查法（、真菌检查法（1 1份份/人）人）3 3、真菌大小培养观察、真菌大小培养观察4 4、观察梅毒螺旋体形态（示教）、观察梅毒螺旋体形态（示教）5 5、性病防治（录像）、性病防治（录像）实验内容实验内容n掌握掌握真菌检查实验原理及方法真菌检查实验原理及方法n掌握掌握血凝实验原理及方法血凝实验原理及方法 n 熟悉螺旋体及支原体形态学观察方法熟悉螺旋体及支原体形态学观察方法 二、教学目的及教学要求（一）、病毒血凝实验原理：某些病毒由于表面有由糖蛋白组成的血原理：某些病毒由于表面有由糖蛋白组成的血凝素（凝素（HA），在一定条件下，能与某些动，在一定条件下，能与某些动物或人的红细胞表面的糖蛋白受体结合产生凝物或人的红细胞表面的糖蛋白受体结合产生凝集，称为红细胞凝集试验或血凝试验，能形成集，称为红细胞凝集试验或血凝试验，能形成血凝现象的病毒有：流感病毒、腮腺炎病毒、血凝现象的病毒有：流感病毒、腮腺炎病毒、麻疹病毒、乙脑病毒等。麻疹病毒、乙脑病毒等。操作步骤试管号试管号123456789生理盐水（生理盐水（ml）1:10 病毒液（病毒液（ml）0.50.25+0.250.25+0.250.25+0.250.25+0.250.25+0.250.25+0.250.25+0.250.25-病毒稀释度病毒稀释度1 101 201 401 801 1601 3201 6401:1280对照对照0.5%鸡红细胞悬液鸡红细胞悬液（ml）每管每管0.25ml 摇匀后，静置室温摇匀后，静置室温30-60min,观察结果观察结果弃去弃去0.25ml*观察结果时要轻拿、勿摇动观察结果时要轻拿、勿摇动血凝试验结果判定血凝试验结果判定n结果观察：凝集特别显著：“”凝集现象次之：“”凝集清楚可见：“”稍显凝集者：“”n血凝效价血凝效价：呈“”凝集时的最高稀释度为最终滴度。意 义n检查病毒的存在。检查病毒的存在。n滴定病毒的血凝效价，采用一定的病毒量进滴定病毒的血凝效价，采用一定的病毒量进行其他实验，通常采用行其他实验，通常采用4 4个血凝单位。个血凝单位。（二）、真菌检查法（二）、真菌检查法（1份份/人）人）n概念：真菌是一大类具有细胞壁和典型细胞核不含叶绿素，不分根、茎、叶的真核细胞型微生物。n分类：单细胞和多细胞单细胞真菌单细胞真菌：呈圆形或卵圆形常见于酵母菌，类酵母菌以出芽方式繁殖。卵圆形G+，着色不一可见假菌丝白假丝酵母多细胞真菌形态多细胞真菌形态菌丝菌丝孢子孢子真菌基本形态真菌基本形态单细胞真菌：白假丝酵母，卵圆形，革兰染色阳性，着色不一，可见单细胞真菌：白假丝酵母，卵圆形，革兰染色阳性，着色不一，可见假菌丝。假菌丝。多细胞真菌：丝状菌或霉菌，有菌丝和孢子。多细胞真菌：丝状菌或霉菌，有菌丝和孢子。烟曲霉烟曲霉白假丝白假丝酵母酵母菌落特征菌落特征:酵母型真菌酵母型真菌 类酵母型真菌类酵母型真菌 丝状菌落丝状菌落 真菌的菌落真菌的菌落白假丝酵母：菌落圆形，较大，白色菌落底层有假菌丝白假丝酵母：菌落圆形，较大，白色菌落底层有假菌丝多细胞真菌：观察气生菌丝，营养菌丝，表面隆起，浅沟及多细胞真菌：观察气生菌丝，营养菌丝，表面隆起，浅沟及菌落基底颜色。菌落基底颜色。白假丝酵母白假丝酵母(血平板血平板)黄曲霉黄曲霉1 1、营养要求不高，常用沙保弱培养基培养。、营养要求不高，常用沙保弱培养基培养。2 2、生长缓慢，培养、生长缓慢，培养1414周才出现典型菌落。周才出现典型菌落。3 3、培养温度为、培养温度为22-2822-28，但某些深部真菌最，但某些深部真菌最 适生长温度为适生长温度为3737。4 4、最适酸碱度为、最适酸碱度为PH4.06.0PH4.06.0。5 5、湿度要求较高。、湿度要求较高。真菌培养特性真菌培养特性原理直接涂片检查 用显微镜直接检查标本中有无菌丝及孢子的存在，对皮肤丝状菌的感染可作初步诊断，本法简单迅速易行。材材 料料 n 标本标本:脚皮等脚皮等n 试剂试剂:10:10KOHKOH n 器具器具:玻片、镊子、酒精灯等玻片、镊子、酒精灯等方法方法 KOH透明法透明法n（1 1）取脚皮少许于玻片上，加二滴取脚皮少许于玻片上，加二滴10%K0H10%K0H溶液，覆盖一盖玻片溶液，覆盖一盖玻片，置火焰上微微加热，置火焰上微微加热，以加速角质溶解，使标本透明，然后微微加以加速角质溶解，使标本透明，然后微微加压，使成薄片，并需驱去气泡，用吸水纸吸压，使成薄片，并需驱去气泡，用吸水纸吸去周围溢液，（如为毛发标本，切忌加热加去周围溢液，（如为毛发标本，切忌加热加压过甚，以保持毛发原形为宜，便于观察真压过甚，以保持毛发原形为宜，便于观察真菌与毛发的关系）显微镜检查。菌与毛发的关系）显微镜检查。n（2 2）将已制备的标本片，先用低倍镜检查，）将已制备的标本片，先用低倍镜检查，然后再用然后再用高倍镜证实高倍镜证实注意：盖玻片倾斜45度慢慢盖上，不能产生气泡！标本片制备标本片制备真菌检查镜下观真菌检查镜下观报告：“找到菌丝或孢子”“找到发外孢子”“找到发内菌丝”（三）、支原体（三）、支原体 支原体是一类没有细胞壁，呈多形性，能在支原体是一类没有细胞壁，呈多形性，能在无生命的培养基中生长繁殖的最小微生物。大无生命的培养基中生长繁殖的最小微生物。大小介于细菌和病毒之间。普通染色不易着色，小介于细菌和病毒之间。普通染色不易着色，用用GiemsaGiemsa染色着色较浅。革兰染色为阴性。营染色着色较浅。革兰染色为阴性。营养要求较高，需要在含养要求较高，需要在含101020%20%马血清和酵母马血清和酵母浸液的培养基上生长。最适的浸液的培养基上生长。最适的pH7.8 pH7.8 8.0.8.0.生长缓慢生长缓慢,在固体培养基上培养在固体培养基上培养2 2 3 3天后才天后才出现菌落。典型的菌落呈出现菌落。典型的菌落呈“荷包蛋荷包蛋”状，中心状，中心厚边缘薄的菌落形态。菌落表面呈颗粒状厚边缘薄的菌落形态。菌落表面呈颗粒状 观察支原体集落观察支原体集落 （四）、观察梅毒螺旋体形态（四）、观察梅毒螺旋体形态梅毒螺旋体：梅毒螺旋体：FontanaFontana镀银镀银染色，菌体非常细小，弯曲，染色，菌体非常细小，弯曲，螺旋状，呈棕褐色，有螺旋状，呈棕褐色，有紧密紧密螺旋。螺旋。下一堂实验课内容 1.鸡胚形态结构观察 2.鸡胚接种 3.病毒的细胞培养能CPE 4.观察病毒包涵体（示教）5.病毒组织培养法(录像)6.实验总结