沙门氏菌测试方法研究报告.docx
沙门氏菌测试方法研究报告摘要：对于预包装食品二级采样的沙门氏菌检验，采用GB4789.4食品安全国家标准的食品微生物检验方法。为了提高工作效率，现将此标准中的称取5份小样合并为1份，进行合并检测。方法改进的测定结果显示，沙门氏菌的检测结果与分测时结果一致，表明此改进方法具可行性，适用于二级采样食品的沙门氏菌检验。前言GB29921标准中规定对于预包装食品的沙门氏菌检验，需采用二级采样的方法，检验的方法步骤则按照GB4789.4食品安全国家标准的规定进行操作。将样品分别称取5份小样，分别加入增菌液进行前增菌，然后分别进行检验鉴定。由于沙门氏菌的检验鉴定比较繁琐，当样品量很大时，5份小样分别检验的传统检验方法就呈现出了一定的缺点，会增加工作人员的工作量，造成时间及资源的浪费。为了提高工作效率，减少资源的浪费，我们根据GB29921-2013食品安全国家标准(食品中致病菌限量)，确认对于结果的判定无影响，将标准的检验步骤进行了一定改进。在GB4789.4标准基础上将分别称取5份食品小样分别检测改进为5份小样合并为1份进行合并增菌培养及检测。通过比较改进方法与标准传统方法的沙门氏菌检验结果,来验证此改进方法的可行性与稳定性。1材料与方法1.1 材料菌种：鼠伤寒沙门氏菌(QDBW-FDM-ArCCl4028)；样品：香肠，面包，市售；培养基：缓冲蛋白陈水(BPW),四硫磺酸钠煌绿(TTB)增菌液，亚硒酸盐胱氨酸(SC)增菌液，亚硫酸钿(BS)琼脂，HE琼脂，木糖赖氨酸脱氧胆盐(XLD)琼脂，沙门氏菌属显色培养基三糖铁(TSI)琼脂，蛋白陈水、靛基质试剂，尿素琼脂,氟化钾(KCN)培养基，赖氨酸脱竣随试验培养基，糖发酵管，邻硝基酚B-D半乳糖苜(ONPG)培养基，半固体琼脂，丙二酸钠培养基，沙门氏菌O和H诊断血清，生化鉴定试剂盒。1.2 仪器与设备冰箱(2C5),恒温培养箱(36±1,42±1),均质器，振荡器,电子天平（感量0lg）,无菌锥形瓶（容量500mL,250mL）,微量移液器及吸头，无菌培养皿（直径90mm）,无菌试管（3mmX50mm、IOmmX75mm）,无菌毛细管，PH计，全自动微生物生化鉴定系统。1.3 方法1.3.1 前增菌按照表1分别称取25g样品放入盛有225mLBPW的无菌均质袋中，以8OOOrmin10OOOr/min均质1min2min,或置于盛有225mLBPW的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打Imin2min。Cl-C5为香肠样品，Ml-M5为面包样品。表1样品编号均质袋编号添加目标菌（+）未添加目标菌（一）样品编号均质袋编号添加目标菌（+）未添加目标菌（一）CI1-Ml1-2+2+C21-M21-2+2+C31-M31-2+2+C41-M41-2+2+C51-M51-2+2+备注：添加的阳性菌为鼠伤寒沙门氏菌（QDBW-FDM-ATCCI4028）,添加量为100-200CFUo+：添加目标菌；：未添加目标菌按照表2分别称取25g样品C（香肠），编号1,2,3,4,5各5份放入盛有BPW的无菌均质袋中，第一次试验只在1号样品中添加阳性菌，将样品混合，检测混样1的结果，依次检测混样2、混样3、混样4、混样5的结果。样品空白是1至5号都未添加阳性菌。表2袋编号样品编有12345样品空白C+-C-+-C-+-C-+-C-+-备注：添加的阳性菌为鼠伤寒沙门氏菌(Qdbw-FDM-ATCC14028),添加量为100-200CFUo+：添加目标菌；：未添加目标菌按照表3分别称取25g样品M(面包)，编号1,2,3,4,5各5份放入盛有BPW的无菌均质袋中，第一次试验只在1号样品中添加阳性菌，将样品混合，检测混样1的结果，依次检测混样2、混样3、混样4、混样5的结果。样品空白是都未添加阳性菌。表3袋编号样品12345样品空白M+-M-+一-M-+-M-+-M-+-备注：添加的阳性菌为鼠伤寒沙门氏菌(QdbW-FDM-ATCC14028),添加量为IOo-200CFU。+：添加目标菌；-：未添加目标菌后续操作步骤按照GB4789.4食品安全国家标准的规定进行。2试验结果与分析2.1表4两个样品的小样分开前增菌的试验结果样品编号均质袋编号添加目标菌(+)未添加目标菌(一)检结果(25g)样品编号均质袋编号添加目标菌(+)未添加目标菌(一)检测结果(25g)Cl1-未检出Ml1-未检出2+检出2+检出C21-未检出M21-未检出2+检出2+检出C31-未检出M31-未检出2+检出2+检出C41-未检出M41-未检出2+检出2+检出C51-未检出M51-未检出2+检出2+检出结果表明，样品为香肠时，未添加鼠伤寒沙门氏菌的五个香肠样品C1-1、C21、C31、C4-1、C5-1结果均未检出25g;添加菌种的五个香肠样品Cl2、C2-2>C3-2>C4-2>C5-2结果均为检出/25g。样品为面包时，未添加鼠伤寒沙门氏菌的五个香肠样品Mll、M2-kM3-1、M4-1、M5-1结果均未检出25g;添加菌种的五个香肠样品MI-2、M2-2M3-2、M4-2、M5-2结果均为检出/25g。表明添加的沙门氏菌对不同的样品没有差异性,单独检样均能检测出阳性结果。2.2表5香肠的五个小样合在一起前增菌的试验结果袋编号样品编吴12345样品空白C+-C-+-C-+-C-+-C-+-检测结果（25g）检出检出检出检出检出未检出结果显示，将5个香肠小样混合，在任一小样中添加添加鼠伤寒沙门氏菌，混合在一起前增菌的试验结果都为检出/25g；不在任一小样中添加鼠伤寒沙门氏菌时，该样品五个小样合在一起前增菌的试验结果为未检出/25g。表明混合检样并不会影响香肠样品沙门氏菌阳性结果的检出。表6面包的五个小样合在一起前增菌的试验结果袋编号样品编章12345样品空白M+-M-+一-M-+-M-+-M-+-检测结果（25g）检出检出检出检出检出未检出结果显示，将5个面包小样混合，在任一小样中添加添加鼠伤寒沙门氏菌，混合在一起前增菌的试验结果都为检出/25g；不在任一小样中添加鼠伤寒沙门氏菌时，该样品五个小样合在一起前增菌的试验结果为未检出/25g。表明混合检样并不会影响面包样品沙门氏菌阳性结果的检出。结论：试验结果表明，将传统的沙门检测方法进行改进，由分别检测样品的五个小样,改为将五个小样混合在一起前增菌，其检测结果与分测时结果一致，由于沙门氏菌检测属于致病性菌检测，标准规定检测出阳性结果即为不合格，五个小样混合的检测方法可以保证检测结果的准确性，表明此改进方法具可行性。这种改进方法适用于大批量食品的沙门氏菌检验，提高了工作效率，减少了资源的浪费，如果具体到每个样品的每个小样都要求结果报告，可以仍然沿用传统检测方法。
