房磊冰冻干燥血小板对创伤修复的治疗作用.ppt

研究背景研究背景结结 论论15研究内容研究内容2技术路线技术路线3实验结果实验结果4-生长因子与创伤修复生长因子与创伤修复血小板血小板基因重组基因重组生长因子生长因子生长因子生长因子来源来源核酸、蛋白质以及其他核酸、蛋白质以及其他细胞外大分子物质细胞外大分子物质巨噬细胞、中性粒细胞、淋巨噬细胞、中性粒细胞、淋巴细胞等细胞巴细胞等细胞成纤维细胞、血管内皮细胞、成纤维细胞、血管内皮细胞、上皮细胞等修复细胞上皮细胞等修复细胞血小板血小板-生长因子与创伤修复生长因子与创伤修复 基因重组细胞因子药物在美国已经开始批准应用并取得良好的临床效果。基因重组药物的缺陷：1单一生长因子作用有限2贝卡普勒明(becaplermin）效应血小板中的生长因子生长因子在创伤修复中的作用更天然更适合商品化的PRP制备方法PRPPRP技术的优缺点技术的优缺点PRPPRP中生长因子中生长因子的含量是静脉血的含量是静脉血的几十倍的几十倍PRPPRP中各种生长因中各种生长因子是天然的，并子是天然的，并且比例符合体内且比例符合体内生理水平生理水平PRPPRP中各种生长因中各种生长因子之间存在相互子之间存在相互协同作用协同作用PRPPRP在在2222士士22条件下振荡保条件下振荡保存仅存仅5d5dPRPPRP中血小板含量中血小板含量因人而异，甚至同因人而异，甚至同一个人在不同时间一个人在不同时间血小板含量也不同血小板含量也不同2006200119951956 采用本实验室自行研制的小分子糖保护法进行冻干血小板的制备保存时间新鲜血小板冻干血小板-20保存0d冻干血小板-20保存30d冻干血小板-20保存90d冻干血小板常温保存20d总蛋白含量62.76.7a64.29.765.46.663.56.761.710.1909080807 70 06 60 0505040403 30 02 20 01 10 00 0冻干血小板冻干血小板-20-20保存保存0d0d冻干血小板冻干血小板-20-20保存保存30d30d冻干血小板冻干血小板-20-20保存保存90d90d冻干血小板冻干血小板常温保存常温保存20d20d新鲜新鲜血小板血小板与各冻干组比较与各冻干组比较a Pa P0.050.05表表1 1 血小板提取液总蛋白含量（血小板提取液总蛋白含量（mg/mlmg/ml）（）（meansmeansSDSD）组别生长因子浓度PDGF-BB(pg/ml)TGF-1（ng/ml）新鲜血小板503.81101.13a5.671.28b冻干血小板-20保存0d497.7498.545.741.27冻干血小板-20保存30d517.2695.455.570.96冻干血小板-20保存90d534.17102.386.041.38冻干血小板常温保存20d501.9798.375.871.21与各冻干组比较与各冻干组比较a Pa P0.050.05；与各冻干组比较；与各冻干组比较b Pb P0.050.05；二、冰冻干燥血小板促创伤 修复作用的研究原代培养的人皮肤成纤维细胞原代培养的人皮肤成纤维细胞人皮肤成纤维细胞的免疫组化鉴定人皮肤成纤维细胞的免疫组化鉴定成纤维细胞是创伤愈合过程中最重要的修复细胞，参与了创伤修复的全过程，成纤维细胞是创伤愈合过程中最重要的修复细胞，参与了创伤修复的全过程，其数量及功能变化对创伤愈合有着极大的影响。其数量及功能变化对创伤愈合有着极大的影响。图图4 4 人皮肤成纤维细胞形态观察人皮肤成纤维细胞形态观察(100(100)实验结果实验结果*:与rhPDGF-BB治疗组比较 P0.05实验结果实验结果血小板浓度数量级为106/ml用M200+2.5%FCS为稀释液第一天和第三天坡度较陡：说明高浓度血小板生长因子对细胞增殖具有抑制作用。第五天坡度较缓和：说明较高浓度组的剩余生长因子还在起作用。2.2.冻干血小板对大鼠皮肤创伤修复作用的研究冻干血小板对大鼠皮肤创伤修复作用的研究 A-16dB-16dC-16dB-12dA-12dD-16dC-12dD-12dA-8dB-8dC-8dD-8dA-4dB-4dC-4dD-4dA-0dB-0dC-0dD-0d A A 未治疗组未治疗组 B B rhPDGFrhPDGF-BB-BB治疗组治疗组 C C 新鲜血小板治疗组新鲜血小板治疗组 D D 冻干血小板治疗组冻干血小板治疗组分组分组创面愈合时间创面愈合时间（d d）未治疗组未治疗组22.1622.16 1.291.29rhPDGFrhPDGF-BB-BB治疗组治疗组20.8820.88 1.341.34新鲜血小板新鲜血小板治疗组治疗组17.3417.34 1.891.89冻干血小板冻干血小板治疗组治疗组17.7617.76 1.611.61实验结果实验结果大鼠的脊柱两侧，大鼠的脊柱两侧，建立两个直建立两个直4cm4cm（12.56cm12.56cm2 2）的）的圆形创口，皮层圆形创口，皮层全部切除，深至全部切除，深至筋膜。筋膜。ababababab*abababa:与未治疗组比较 P0.05b:与rhPDGF-BB治疗组比较 P0.05实验结果实验结果 A A 未治疗组组未治疗组组 B B rhPDGFrhPDGF-BB-BB治疗组治疗组 C C 新鲜血小板治疗组新鲜血小板治疗组 D D 冻干血小板治疗冻干血小板治疗组组 实验结果实验结果A A 未治疗组未治疗组 B B rhPDGFrhPDGF-BB-BB治疗组治疗组 C C 新鲜血小板治疗组新鲜血小板治疗组 D D 冻干血小板治疗组冻干血小板治疗组2.2.冻干血小板对大鼠皮肤创伤修复作用的研究冻干血小板对大鼠皮肤创伤修复作用的研究实验结果实验结果大鼠的脊柱大鼠的脊柱两侧，建立两侧，建立两个直两个直2cm2cm的圆形创口，的圆形创口，皮层全部切皮层全部切除，深至筋除，深至筋膜。膜。