植物脱毒技术.ppt

植物脱毒植物脱毒一、脱毒苗培育的意义二、脱毒的方法三、脱毒苗生根培养与驯化移栽四、脱毒苗鉴定五、脱毒苗保存与繁殖 一、脱毒苗培育的意义v（一）植物病毒的危害v（二）病毒传播的方式v（三）脱毒苗培育的意义二、脱毒的方法v（一）茎尖培养脱毒v（二）热处理脱毒v（三）茎尖脱毒与热处理相接合v（四）微体嫁接脱毒法v（五）愈伤组织培养脱毒v（六）珠心胚培养脱毒法v（七）花药培养脱毒v（八）抗病毒药剂法（一）茎尖培养脱毒v1微茎尖培养脱毒机理v2微茎尖培养脱毒的过程感染病毒植株顶芽或腋芽剥离茎尖茎尖培养植株再生病毒检测离体快繁防虫网室内繁殖脱毒苗图11-1 微茎尖培养生产脱毒苗的流程图（陈世昌，2011）马铃薯脱毒马铃薯脱毒技术任务任务1选取外植体并灭菌选取外植体并灭菌任务任务3解剖镜下茎尖剥离与接种解剖镜下茎尖剥离与接种 任务任务2准备培养基准备培养基 任务任务4继代培养继代培养 任务任务5诱导生根诱导生根 任务任务6试管苗驯化移植试管苗驯化移植 2024-5-8任务一任务一 外植体选取及消毒外植体选取及消毒选择：选择：选取生长旺盛、健壮、无病或患病相对较轻的选取生长旺盛、健壮、无病或患病相对较轻的的植株。切取的植株。切取4-6cm的顶芽或侧芽，除去外部可见的的顶芽或侧芽，除去外部可见的小叶。小叶。消毒：消毒：先用自来水冲洗先用自来水冲洗30mink，再用，再用75%的酒精漂洗的酒精漂洗几秒到十几秒，然后用几秒到十几秒，然后用0.1%的氯化汞或的氯化汞或20倍的次氯酸倍的次氯酸钠液消毒钠液消毒10-15min。消毒后的材料用无菌水冲洗。消毒后的材料用无菌水冲洗3次。次。任务二 准备培养基准备培养基 v初代培养：MS+0.5mg/L6-BA+0.1mg/LGA3v+0.1mg/LNAA+3%蔗糖+5g/L琼脂，PH5.8v继代增殖：MS+0.1mg/LNAA+3%蔗糖+5g/L琼脂，PH5.82024-5-8将消毒后的材料在解剖镜下进行剥离，如果是用于快速繁将消毒后的材料在解剖镜下进行剥离，如果是用于快速繁殖的茎尖材料可带殖的茎尖材料可带2-4个叶原基或更多，如果是用于脱毒的个叶原基或更多，如果是用于脱毒的切取切取0.1-0.5mm,带带1-2个叶原基，并迅速接到培养基上。个叶原基，并迅速接到培养基上。解剖镜下剥取茎尖解剖镜下剥取茎尖任务三任务三 茎尖剥离和接种茎尖剥离和接种任务四 继代培养继代培养（二）热处理脱毒1热处理脱毒的原理2热处理脱毒的方法温烫处理脱毒法热空气处理脱毒法3影响热处理脱毒的因素4热处理的优缺点（三）茎尖脱毒与热处理相接合（四）微体嫁接脱毒法（五）愈伤组织培养脱毒v（六）珠心胚培养脱毒法v（七）花药培养脱毒v（八）抗病毒药剂法 三氮唑核苷、5-二氢尿嘧啶、双乙酰-二氢-5-氮尿嘧啶、三、脱毒苗生根培养与驯化移栽四、脱毒苗鉴定（一）直接观察法（二）指示植物鉴定法 1汁液涂抹鉴定 2小叶嫁接法待检草莓叶，叶柄削成楔形指示植物削去中间小叶，从切口纵切1.5cm左右将削好的待检小叶插入切口封口膜包扎喷少量水，用小孔塑料袋罩上，放入防虫网室，10d后去袋图11-2 草莓指示植物小叶嫁接检测法指示植物待检植物砧木砧木指示植物待检植物图11-3双重芽接法（王国平，2002）图11-4双重切接法（王国平，2002）v3双重芽接法v4双重切接法（三）抗血清鉴定法（四）分子生物学鉴定法 1双链RNA法（dsRNA）2核酸杂交技术 人工合成能与病毒碱基互补的(cDNA）3聚酶链反应技术（PCR)（五）电镜检测法五、脱毒苗的保存与繁殖（一）脱毒苗的保存1隔离保存2离体保存（1）低温保存（2）超低温保存 快速冷冻法 慢速冷冻法 分步冷冻法 干燥冷冻法 （二）脱毒苗繁殖